摘要：目的耳念珠菌是一种新出现的多重耐药酵母菌,本研究拟建立基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术的耳念珠菌检测方法并评价。方法针对念珠菌5.8S和ITS2基因区域设计耳念珠菌特异性引物和念珠菌通用引物,评价其最低检测限;选取65株菌对其特异度进行评价;同时测定其在非培养条件下对该病原的检出能力。用5种常见念珠菌和耳念珠菌对念珠菌通用RPA检测方法进行评价。结果耳念珠菌特异性RPA检测方法检测下限为103拷贝/反应,与聚合酶链式反应(PCR)检测下限相同,37℃下反应时间20 min,特异度为100.00%。可以在2.5 h内检测出血液中的耳念珠菌,其检测下限为1.02×10^(3)菌落形成单位(CFU)/mL,与PCR检测下限相同。念珠菌通用引物可通过扩增产物大小不同,实现5种常见念珠菌与耳念珠菌的初步鉴别。可在白色念珠菌与耳念珠菌菌量比(5∶1,1∶1,1∶5)的混合感染情况下产生两种易于区分的条带。种易于区分的条带。结论本研究建立的耳念珠菌RPA检测方法,具有简便、快速、成本低的特点,表现出了较高的灵敏度与特异度,可以实现5种临床常见念珠菌与耳念珠菌的初步鉴别诊断。