摘要：环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification Method,LAMP)是一门新兴的基因扩增技术,具有操作简单、快速、高特异性、高敏感性、不需要特殊检测设备等特点。随着分子生物学技术的发展,LAMP也得到了长足的发展:多重引物的设计和与ELISA的联合使用使得能够同时检测多种病原以及与实时荧光技术的配合可以实现实时监测反应的过程。LAMP检测技术也已广泛用于临床疾病的诊断、病原微生物,包括流行性细菌或病毒等的定性检测及动物物种和胚胎的性别鉴定,此外它也应用于口蹄疫这种人畜共患的急性传染病的检测中。从简单的LAMP到多重LAMP,再到多重荧光检测以及与其他技术的连用,使得口蹄疫的检测方法不断进步。简述了LAMP的相关原理、发展和应用以及在口蹄疫病毒检测中的应用等研究进展。

摘要：目的原核表达猪圆环病毒2b亚型(porcine circovirus subtype 2b,PCV2b)Cap融合蛋白,并分析其免疫原性。方法以PCV2毒株(CAU0673)基因组为参考序列,His-Sumo-PCV2b-Cap-pUC57重组质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增目的片段;将其产物克隆至pMAL-C4x载体中,构建pC4x-PCV2b-Cap重组质粒,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物进行直链淀粉树脂纯化。SDS-PAGE分析目的蛋白的可溶性,Western blot检测其反应原性;以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,Western blot检测小鼠血清抗体特异性。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pC4x-PCV2b-Cap构建正确;融合蛋白MBP-Cap(matlose binding protein Cap)最适诱导条件为1 mmol/L IPTG 37℃诱导6 h,其以可溶性形式存在,相对分子质量约为81000,与PCV2b阳性猪血清、兔抗MBPtag多克隆抗体及免疫小鼠抗血清均可发生特异性反应。结论成功构建了pC4x-PCV2b-Cap重组表达载体,获得了可溶性的MBP-Cap蛋白,其纯化蛋白具有较好的免疫原性。本文为PCV2b诊断试剂盒的研发奠定了理论基础。