摘要：改革开放三十年来,随着中国经济的高速发展,环境污染问题也日益加重。已经到了不可忽视的地步。发轫于计划经济时代的传统环境管理模式,更偏重于采用命令控制方法和直接管制手段,这些方法和手段具有不稳定、阶段性和易于权力寻租等天然弱点。本文从加快环境经济体系建设入手。探讨环境保护的有效方式。

摘要：目的:利用pEGFP质粒载体构建介导结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA表达的质粒,筛选有效的抑制序列后,研究其对HSC-T6中TGF-β1、CTGF及细胞外基质表达的影响。方法:1.分别设计3对针对CTGF的有小发夹结构的两条DNA序列及1对非特异对照序列,构建重组体成功后转染HSC-T6,24h后通过RT-PCR及Western blotting分析HSC-T6 CTGFmRNA及蛋白表达水平,筛选出有效抑制CTGF表达的序列。2.将已构建并筛选出有最高抑制效率的pEGFP-CTGFshRNA转染HSC-T6,培养24、48h后用RT-PCR和/或Westernblotting检测各组细胞中TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因的表达;放免法分析细胞上清液中Ⅲ型前胶原、IV型胶原、透明质酸和层黏连蛋白的含量。结果:将构建成功的3组pEGFP-CTGFshRNA转染肝星状细胞后,筛选出两组能高效抑制CTGF表达的序列;pEGFP-CTGFshRNA能明显抑制HSC-T6CTGF、Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白的表达,降低上清液中Ⅲ型前胶原、IV型胶原、透明质酸和层黏连蛋白的含量(P<0.01或P<0.05),而对TGF-β1的基因表达则无影响。结论:pEGFP-CTGFshRNA能高效抑制肝星状细胞中CTGF及细胞外基质的表达;CTG-FshRNA介导的RNA干扰有望对慢性肝病所致肝纤维化具有治疗潜力。

摘要：目的:利用Pgenesil-1质粒载体构建介导结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA表达的质粒,并筛选有效的抑制序列。方法:分别设计3对有小发夹结构的两条DNA序列及1对非特异对照序列,经退火成互补双链,再克隆至带有U6启动子的质粒载体Pgenesil-1中,构建重组体,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析。将构建成功的4组重组体转染HSC-T6 24 h后,通过半定量RT-PCR分析HSC-T6 CTGFmRNA的表达水平,与空白对照及仅加转染试剂组比较分析。结果:CTGF的shR-NA片段被成功克隆到Pgenesil-1质粒载体中,经酶切与测序证实构建成功,转染HSC-T6 24 h后,与空白对照组相比,通过半定量RT-PCR分析发现有两组细胞CTGFmRNA水平明显下降,24 h抑制效率分别为(74±5)%,(P<0.01);(61±3)%,(P<0.05)。转染非特异shRNA组及仅加转染试剂组CTGFmRNA表达水平无明显变化。结论:成功构建了能表达CTGFshRNA的3组重组体,并筛选出能高效抑制CTGF表达的shRNA序列,为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径奠定了实验基础。