摘要：目的本实验旨在研究siRNA抑制DNA修复门控基因Rad52、Ku70和Ku80的效果并筛选出高效的siRNA作用靶位。方法依据siRNA设计原则,针对每一个门控基因的mRNA序列各选择了2个靶位点并构建了相应的siRNA表达载体(psiRNA1～6)。酶切分析及DNA测序鉴定重组质粒构建成功后,将其转染人肝癌细胞株HepG2。RT-PCR和Western Blot分别用来检测psiRNAs在转录水平和翻译水平干扰靶基因的效果。结果psiRNA1～6作用细胞后明显抑制了靶基因的表达。比较而言,psiRNA1、psiRNA4、psiRNA5干扰效果分别比psiRNA2、psiRNA3、psiRNA6更佳。结论siRNA为进一步研究DNA修复门控基因Rad52、Ku70和Ku80的功能奠定基础。

摘要：目的构建靶向Pokemon基因的短发夹RNA（shRNA）真核表达载体，为研究Pokemon基因在肿瘤发生发展中的作用奠定基础。方法利用基因重组技术，依据siRNA的设计原则，针对目的基因的mRNA序列筛选了3对siRNA序列以及一对阴性对照序列，将其分别插入真核表达载体psiRNA-hHlneo H1启动子下游，经α互补筛选、酶切和DNA测序鉴定，构建靶向Pokemon基因的RNAi真核表达载体。结果酶切鉴定及DNA测序结果显示siRNA片断正确，与设计序列一致，且成功插入预定位点。结论靶向Pokemon基因的shRNA重组质粒成功构建，为进一步研究Pokemon基因在多种疾病中的作用以及探索肿瘤的基因治疗奠定基础。

摘要：目的构建细胞周期蛋白E(Cyclin E)小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,并检测其抑制乳腺癌细胞株MCF-7中Cyclin E表达的效果。方法根据基因文库中Cyclin E的cDNA序列,设计并合成两段siRNA,分别转入到pGENESIL-1质粒中,并对重组质粒(命名为pGENESIL/Cyclin E-1和pGENESIL/Cyclin E-2)进行测序鉴定。脂质体介导下转染MCF-7细胞株,RT-PCR检测转染后Cyclin E的表达。结果Cyclin E siRNA真核表达载体构建成功,测序结果显示插入片段的方向和序列与预想一致。RT-PCR检测显示Cyclin E的表达显著降低。结论Cyclin E siRNA真核表达载体的成功构建为进一步研究以Cyclin E为靶位点对乳腺癌进行基因治疗奠定了重要的实验基础。

摘要：乳腺癌是威胁女性健康的常见恶性肿瘤，寻找乳腺癌分子靶向治疗的新靶点，对于乳腺癌的基因治疗尤为重要。细胞周期蛋白E（CyclinE）是细胞周期中G1／S期的关键调节蛋白。很多国内外乳腺癌疾病的研究者都注意到了CyclinE同乳腺癌预后之间的密切关系，并考虑可否将其作为一个乳腺癌基因治疗的新靶点。我们设计并合成了针对CyclinE的小干扰RNA（siRNA）序列，采用RNA干扰（RNAi）方法沉默乳腺癌细胞系中CyclinE的表达，为进一步探究CyclinE在乳腺癌的发生、发展及转归中所产生的分子生物学效应提供实验工具，并鉴定其基因沉默的效率，同时探讨影响RNAi效率的因素。

摘要：目的　构建一种新型的CYP2B1自杀基因表达载体并检测其在肿瘤细胞中的表达。方法　根据genebank中鼠CYP2B1基因的核苷酸序列设计一对引物 ,以pc3 /2B1为模板进行PCR扩增 ,将PCRCYP2B1基因产物定向插入到pcDNA3 0中 ,构建CYP2B1基因表达载体pcDNA3 0 /CYP2B1;通过酶切、PCR及测序鉴定重组体。采用脂质体介导法将pcDNA3 0 /CYP2B1转染三种肿瘤细胞株 ,RT -PCR检测CYP2B1基因在各细胞株中的表达。结果　目的片段均成功插入相应的载体中 ,CMV启动子调控下的CYP2B1基因在不同的肿瘤细胞株中实现了表达。结论　CMV启动子调控的CYP2B1真核基因表达载体是肿瘤基因治疗中一种新型、高效的治疗载体。