摘要：目的 以金黄色葡萄球菌肠毒素A (staphylococcal enterotoxin A, SEA)为代表,设计并合成一种适配体修饰功能化磁性材料,与酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测技术相结合,进一步提高检测方法灵敏度。方法 样品经SEA适配体修饰磁性微球富集后,结合SEA的ELISA试剂盒检测样品中SEA含量,建立SEA检测的磁分散固相萃取-酶联免疫吸附新方法。结果 与仅采用ELISA试剂盒测定SEA的方法相比,本研究方法的灵敏度可提高10倍,检测方法的线性范围为0.01~0.81μg/L,同时检测方法具有良好的特异性。将建立的检测方法用于牛奶中SEA的检测,回收率在84.45%~114.45%之间。结论 本方法操作简单、特异性强、灵敏度高,同时具有广泛的适用性,可通过特定适配体修饰磁性微球实现不同目标物的检测,同时适配体修饰功能化磁性材料也可与其他检测技术联合使用,提高检测的灵敏度。

摘要：目的以金黄色葡萄球菌为典型食源性致病菌代表,利用规律间隔成簇短回文重复序列方法(CRISPR)-相关蛋白(Cas)建立典型食源性致病菌检测新技术。方法在金黄色葡萄球菌存在的情况下,金黄色葡萄球菌可与磁珠上吸附的金黄色葡萄球菌适配体相结合,将原本结合的互补链释放到溶液中,通过磁分离将含有游离的互补链上清液分离出来,与特异性设计的CRISPR RNA(crRNA)结合,激活Cas12a蛋白的反式切割DNA酶活性,对核酸荧光探针进行切割,随后检测体系的荧光强度。结果本方法在前处理完成后,检测反应可控制在1 h内,远低于国标法所需时间,且所需仪器设备简便,易于研发检测试剂盒。与市售金黄色葡萄球菌快速检测试剂盒相比,本实验方法不需要进行前增菌及裂解步骤,耗时较短,且定性结果可满足日常监督检查工作需要。结论本方法操作简便、易于上手、耗时较短,已研制成试剂盒,可与配套便携式检测箱一起使用,方便食堂、驻训等现场对金黄色葡萄球菌进行快速定性筛检。该方法也具有广泛适用性,针对其他食源性致病菌,可通过修改为特定适配体及设计对应crRNA引物,实现不同食源性致病菌的检测。