摘要：目的建立基于微流控芯片平台的中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)一体化自动检测方法。方法制备MERS-CoV假病毒颗粒阳性参考品,设计针对病毒ORF1b基因区的引物和探针,制备基于实时荧光RT-PCR全流程的一体化集成微流控芯片,实现含样品裂解、核酸提取、核酸扩增和荧光检测的全自动检测。利用芯片内预包埋的内参基因对芯片系统性能进行监测,利用MERS-CoV假病毒阳性参考品对方法的灵敏度、特异性和重复性检测评价。结果微流控芯片中内参基因可以稳定扩增。自动化方法可检测原始样本中100拷贝(copies)的MERSCoV假病毒,优于常规实时荧光RT-PCR(500 copies检出限);100 copies假病毒重复测试6次CT值为(39.80±0.53),变异系数为1.34%。用自动化方法检测其他冠状病毒和人源基因均为阴性。结论建立的MERS-CoV微流控芯片一体化自动检测方法具有良好的稳定性、灵敏度和特异性,操作简便、快速,不受实验场地限制,可用于中东呼吸综合征现场即时检测。

摘要：本研究设计了10种植物病毒和各种对照的探针，将探针固定在醛基化玻璃片基上制备基因芯片。用常规的Trizol法提取植物总RNA，根据病毒的外壳蛋白基因或复制酶基因设计特异性引物，经RT—PCR扩增相应区段并用Cy3-dCTP进行标记。将标记的PCR产物与芯片杂交，扫描仪对杂交结果扫描，GenePix Pro 4．0软件对杂交图像进行分析。结果表明，该芯片可以从病毒感染样本中检测到特异性识别信号，检测灵敏度比RT—PCR高10-100倍，所以，基因芯片能对植物病毒作出快速、准确的检测。

摘要：为从临床样品中检测和分析SARS CoV病毒打基础 ,并为分析SARS CoV病毒的复制和转录等机理提供一种有效方法。以SARS冠状病毒TOR2株序列作为标准设计和制备一种覆盖SARS冠状病毒全基因组的寡聚核苷酸芯片 ,探针长度为 70nt,每相邻的探针序列重复 2 5nt,共660条。用该芯片分析了细胞培养的SARS CoV病毒总RNA、7个SARS CoV病毒的基因克隆片段。对RNA样品用随机引物进行反转录PCR获得cDNA。对DNA用随机引物扩增和dUTP cy3标记。结果用这种芯片杂交检测SARS CoV病毒RNA可见阳性信号呈全基因组分布 ,并且有多处连续的阳性信号点 ;用正常人的白细胞RNA为对照 ,杂交未出现明显阳性信号。检测 7个SARS CoV病毒基因克隆片段 ,在该片段相应的探针区段出现连续阳性信号点。这种方法可有效地检测和分析样品中SARS冠状病毒全基因组的信息。

摘要：设计百合无症病毒、植物18SrRNA基因的特异扩增引物和各种对照的探针,将探针固定在醛基化玻璃片基上,完成植物基因芯片制备。提取百合种球总RNA,经RT-PCR扩增相应区段并用Cy3dCTP进行标记,用标记的PCR产物与芯片杂交,扫描仪对杂交结果进行扫描,GenePix Pro4.0软件对杂交图像进行分析。结果从荷兰进口的百合种球中检测出百合无症病毒,证明了该实验研制的植物病毒基因芯片的准确性和灵敏性。