摘要：目的对简单序列重复区间聚合酶链反应(ISSR-PCR)进行改进和优化,以建立一种改进型霍乱弧菌分子分型和遗传溯源技术。方法通过设计、筛选优良扩增引物和优化反应体系对ISSR-PCR进行技术改进,并选择75株霍乱弧菌作为方法学的分型测试样品进行实验验证。结果经筛选以引物ISSR_GA5分型效果最佳。对ISSR-PCR实验条件进行优化,确定最佳反应体系:Mg2+浓度为2.0mmol/L,dNTPs浓度为0.3mmol/L、引物浓度为1.2μmol/L。采用改进型ISSR-PCR技术能正确区分霍乱弧菌菌株中的产毒株(流行株)和非产毒株(非流行株)、O1群/O139群和非O1/非O139群以及本地株和外地株。结论建立的改进型ISSR-PCR技术分型效率高,为我国卫生检疫和疾控部门开展霍乱等重要传染病的防控和疫情溯源提供了新的、简便实用的技术方法。

摘要：目的通过研究国境口岸常见11种蚊虫的细胞色素C氧化酶亚基I（COI）基因序列差异性,并分析其系统进化关系,建立口岸常见蚊种的分子鉴定方法。方法设计l对扩增COI部分编码区的PCR引物,对广东、海南和云南等国境口岸采集的致倦库蚊、白纹伊蚊、中华按蚊等常见11种成蚊进行PCR扩增和序列测定,依据COI核苷酸序列进行系统进化分析。结果 11种蚊虫的COI基因扩增片断长度均为650 bp左右,A＋T含量为66.51%-69.97%。同源性比较表明,同一蚊种间核苷酸序列同源性为94.8%-100.0%;不同蚊种间核苷酸序列同源性为77.7%-91.8%。系统进化关系显示,从种的水平上看,白纹伊蚊、致倦库蚊、中华按蚊等上述所有蚊种均聚集成簇,即同种之间呈明显的聚集,与形态学鉴定结果相一致。在属的水平上,库蚊属、阿蚊属、伊蚊属等均聚集成簇,形成各自的单独一支;各属间,阿蚊属与伊蚊属先聚类,再分别与库蚊属、曼蚊属聚类为库蚊亚科,按蚊属与上述蚊种亲缘关系较远。结论本次研究中的COI基因差异可作为国境口岸常见11种蚊虫分类鉴定的分子标记,为口岸常见蚊种的分子鉴定提供帮助,也可为口岸外来的或新发现的蚊种的鉴别提供分子水平的技术依据。