摘要：根据p53基因的序列设计并合成了能特异性检测p53mRNA的分子信标(MB),发展了一种快速定量测定细胞内总RNA提取物中p53mRNA的方法.采用鼻咽癌(CNE2)细胞系和经RNA干扰技术降低p53基因表达的CNE2-p53RNAi细胞系,抽提总RNA并用MB检测,验证了MB的检测对象是p53mRNA.将该方法应用于多种肿瘤细胞内p53基因表达水平的分析,表达变化趋势与经典的mRNA分析方法RT-PCR检测结果相符.在此基础上,用MB对5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理的肺腺癌细胞(A549)进行了p53mRNA的体外定量检测,结果表明采用MB能够快速地获知该药物对细胞内p53mRNA表达影响的信息.

摘要：系统评价虎力散治疗膝骨关节炎的有效性和安全性,以期为临床实践提供参考依据.检索Cochrane Library、EM-base、PubMed、Web of Science、中国知网(CNKI)、万方(Wanfang)、维普(VIP)、中国生物医学文献服务系统(SinoMed),搜索国内外数据库中关于虎力散胶囊治疗膝骨关节炎的随机对照试验(RCT),检索时限均为建库至2021年11月15日.由2名研究者独立筛选文献、提取资料,使用风险偏倚评估(ROB)工具对纳入研究的偏倚风险进行评价,采用RevMan 5.4软件进行Meta分析.共纳入12项RCTs,样本量1703例,其中试验组1075例,对照组628例.Meta分析结果显示,①虎力散胶囊+常规治疗对膝骨关节炎的症状缓解率(RR=1.19,95%CI[1.09,1.30],P<0.0001)、Lysholm评分(MD=11.17,95%CI[7.35,15.00],P<0.00001)、视觉模拟量表(VAS)评分(MD=-0.99,95%CI[-1.30,-0.68],P<0.00001)、膝关节功能评分(RR=8.94,95%CI[6.51,11.37],P<0.00001)优于常规治疗,差异有统计学意义.②虎力散胶囊治疗膝骨关节炎的症状缓解率(RR=1.38,95%CI[1.13,1.69],P=0.002)、膝关节功能评分(MD=2.88,95%CI[0.81,4.94],P=0.006)优于常规治疗,差异有统计学意义;对VAS评分的改善差异无统计学意义(MD=-0.57,95%CI[-1.42,0.29],P=0.19).③虎力散胶囊+常规治疗对膝骨关节炎的症状缓解率对比追风透骨胶囊+常规治疗,差异无统计学意义(RR=1.07,95%CI[0.91,1.25],P=0.44).④虎力散胶囊+常规治疗对膝骨关节炎的Lequesne评分对比常规治疗/追风透骨胶囊+常规治疗,差异无统计学意义(MD=-2.17,95%CI[-6.29,1.96],P=0.30);试验组不良反应发生率低于对照组,差异有统计学意义(RR=0.57,95%CI[0.34,0.96],P=0.03).结果表明,使用虎力散胶囊/虎力散胶囊+常规治疗,可提高膝骨关节炎患者的症状缓解率、Lysholm评分、膝关节功能评分和VAS评分,同时缓解膝关节疼痛、肿胀、运动限制等症状,目前尚未发现严重不良反应.今后仍需采用大样本、设计严谨、符合国际规范的RCT来验证虎力散胶囊治疗膝骨关节炎的有效性与安全性.

摘要：目的构建人工miR-vif,并研究其对HIV-1感染宿主细胞的影响。方法以miR-155为基础骨架,根据HIV-1vif基因序列设计并合成4对miRNA寡聚单链DNA,构建4个人工miR-vif。采用qPCR技术检测其对vif基因的沉默效率和对干扰素表达的影响;MTT法测定其对被转染细胞的毒性;HIV-1假病毒实验技术检测其对感染的抑制作用。结果 qPCR结果显示,4个人工miR-vif对vif基因都具有一定的沉默效果,其中miR-vif-1的沉默效率最高,达68%。且不会对细胞干扰素的表达产生影响。MTT实验证实miR-vif-1不会影响被转染细胞的活性,此外,HIV-1假病毒实验显示,miR-vif-1对HIV-1p24的抑制作用达66.5%,效果明显。结论所获得的miR-vif-1对HIV-1的复制具有良好的抑制作用,可为进一步的抗HIV-1感染研究提供基础。

摘要：目的　早期诊断汉坦病毒感染。方法　根据国际标准株（７６１１８ ，８０３９） Ｍ 基因Ｇ１ 区设计两对公有引物和一条探针，按异硫酸氰胍—酚一步法提取汉坦病毒ＲＮＡ，采用ＲＴｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ检测病毒细胞培养上清原液及稀释液、１６ 份对照组血清、４０ 份ＨＦＲＳ急性期（１ ～５ 天） 血清标本中的汉坦病毒ＲＡＮ，所有扩增产物采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 或Ｄｏｔ ｂｌｏｔ 证实其特异性。结果　汉坦病毒细胞培养液和４０ 份ＨＦＲＳ急性期血清标本中的３８ 份均可扩增出特异性的片段４５３ｂｐ ，而１０ 份正常人血清和１２ 份非ＨＦＲＳ血清均为阴性，该方法敏感度高于细胞培养。结论　ＲＴｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ 是一种敏感、特异、快速的方法，可用于汉坦病毒感染的早期诊断。

摘要：目的研究反义核酸的抗病毒作用。方法设计合成了针对鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）前Ｓ（ＰｒｅＳ）基因区第９５１９６８位核苷酸的硫代反义寡脱氧核苷酸（ＡＳＯＤＮ），以２０μｇ／ｇ体重／日剂量对３只腹腔感染ＤＨＢＶ５２毒株后，血清ＤＨＢｓＡｇ及ＤＨＢＶＤＮＡ阳性鸭连续静脉注射１０天，同时以等体积生理盐水注射另３只感染鸭作为对照。结果对照鸭注射生理盐水后，血清ＤＨＢｓＡｇ及ＤＨＢＶＤＮＡ阳性未见明显改变，肝组织ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交在３０与２３ｋｂ左右杂交信号明显。注射ＡＳＯＤＮ鸭在１０天后，２／３鸭血清ＤＨＢｓＡｇ及ＤＨＢＶＤＮＡ量显著降低，３／３鸭肝组织中３０ｋｂ左右的杂交信号显著减弱，２３ｋｂ左右未见杂交信号。结论说明该段ＡＳＯＤＮ在鸭体内能部分抑制ＤＨＢＶ的复制与抗原表达。

摘要：为了深入研究反义ＤＮＡ对乙肝病毒的抑制作用，设计合成了针对乙肝病毒基因不同功能区域的反义片段２０个，无关序列４个，长度为１５聚到１８聚，分为无修饰反义ＤＮＡ、反义ＤＮＡ－多聚赖氨酸共价连接物、部分硫代和全硫代反义ＤＮＡ四种。合成反应是在ＡＢＩ３８１型ＤＮＡ合成仪上以１μｍｏｌ或１０μｍｏｌ的规模进行的，但在计算机程序上作了一些修改以适应于部分硫代和全硫代ＤＮＡ合成。抑制实验的结果说明，所有合成的反义ＤＮＡ均对乙肝病毒有不同程度的抑制作用，互补于乙肝病毒ＰｒｅＳ＿２翻译起始区的反义１５聚－多聚赖氨酸表现出很强的抑制活性。针对核心蛋白翻译起始区的反义ＤＮＡ和针对聚合酶翻译起始区下游的反义ＤＮＡ也均表现出好的抑制活性。

摘要：【目的】探究猪细胞周期素Cyclin A(pCyclinA)及其依赖性激酶2(pCDK2)对猪细小病毒(PPV)增殖的调控作用,为开展PPV复制机制研究提供依据。【方法】采用RT-PCR扩增pCyclinA和pCDK2基因,克隆至真核表达载体pEGFP-C1中构建重组载体,转染猪睾丸细胞(ST),经新霉素(G418)筛选获得pCyclinA或pCDK2过表达的ST细胞株。设计pCyclinA和pCDK2基因特异性干扰片段(shRNA)CycA894和CDK1163,构建干扰表达载体,转染ST细胞,经G418筛选得到pCyclinA和pCDK2低表达的ST细胞株,实时荧光定量PCR检测其干扰效率。流式细胞术分析pCyclinA和pCDK2过表达和低表达对ST细胞周期的影响。将猪细小病毒NY毒株(PPV-NY)接种过表达和低表达的ST细胞,用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测病毒滴度。【结果】pCyclinA和pCDK2基因的开放阅读框(ORF)分别为1299和897 bp,构建了重组载体pEGFP-pCyclinA和pEGFP-pCDK2。荧光显微镜观察结果显示,融合蛋白EGFP-pCycA和EGFP-pCDK2分别在过表达细胞株ST-pEGFP-pCyclinA和ST-pEGFP-pCDK2中稳定表达。构建了干扰载体pGPU6-GFP/CycA894、pGPU6-GFP/CDK1163和pGPU6-GFP/-shNC(阴性对照);低表达细胞株ST-pGPU6-GFP/CycA894和ST-pGPU6-GFP/CDK1163中的pCyclinA、pCDK2基因的mRNA表达量均极显著降低(P0.05)。【结论】pCyclinA或pCDK2过表达均能抑制PPV增殖;pCyclinA低表达可促进PPV增殖,pCDK2低表达对PPV增殖无显著影响;pCyclinA低表达极显著降低G0/G1期细胞比例、但极显著增加S期和G2/M期细胞比例。

摘要：目的建立辛德毕斯病毒核酸的SYBRGREENΙ荧光PCR检测方法。方法根据辛德毕斯病毒基因组核苷酸序列特性设计引物。病毒在BHK21细胞上繁殖扩增后提取RNA和逆转录。以病毒cDNA为模板分别进行SYBRGREENΙ荧光PCR和常规RTPCR扩增,并对SYBRGREENΙPCR法的灵敏性、特异性、重复性等进行分析。结果最适退火温度为55℃,最适引物浓度为0.5μmol/L。用该方法检测2株SIN病毒株YN87448和XJ160结果均为阳性,而对其他虫媒病毒如甲病毒属Geta病毒、乙脑病毒、Batai病毒、Banna病毒、环状病毒及西方马脑炎病毒合成模板检测时结果均为阴性。根据病毒空斑形成实验结果,将YN87448病毒悬液进行连续10倍稀释后分别用常规PCR和SYBRGREENΙ荧光PCR方法进行检测。结果SYBRGREENΙ荧光PCR检测敏感性比常规PCR方法要高近100倍,检出下限可达0.1PFU/ml。对模拟感染的人血清标本检测结果表明人血清中成分对检测体系无明显影响。对151份不明原因发热和病毒性脑炎患者的血清或脑脊液标本进行检测,结果检测到6份标本阳性。结论本实验建立了辛德毕斯病毒特异性核酸的SYBRGREENΙ荧光PCR检测方法,实验结果显示了较好的特异性、广谱性,初步证实可应用于临床标本的检测,为将来用于临床和调查辛德毕斯病毒在我国的流行情况提供了新的技术手段。

摘要：目的　观察病毒血症在病程各期的变化。方法　根据汉坦病毒血清Ⅰ型 76 - 1 1 8株及血清Ⅱ型 80 -39株M基因G1区设计两对公有引物及一条探针 ,应用RT nestedPCR方法对 5 7例 96份肾综合征出血热(HFRS)患者血清中HV RNA检测 ,所有PCR产物用DOT Blot证实。结果　 96份样本中 6 8份阳性 ,阳性率70 .8% ;在病程第 1、2、3周 ,HV RNA检测率分别为 94.7%、47.5 %、2 5 % ,P <0 .0 5 ;重型病人持续 2周HV RNA阳性检测率 1 0 0 % ,而轻、中型分别为 1 2 .5 %及 42 .8% ,P <0 .0 5。结论　在HFRS病程中 ,病毒血症是一个急性过程 ,与发热期相平行 。

摘要：以miR-155为基础骨架,根据HIV-1 pol基因序列设计并合成4对miRNA寡聚单链DNA,构建4个人工miR-pol,并对其进行功能分析.qPCR结果显示,4个人工miR-pol对pol基因都具有一定的沉默效果,其中miR-pol-4的沉默效率最高,达76%.进一步的实验证实miR-pol-4不会影响被转染细胞的活性,也不会对细胞干扰素的表达产生影响.此外,HIV-1假病毒实验显示,miR-pol-4对HIV-1的复制具有良好的抑制作用.因此,所获得的miR-pol-4将可为进一步的抗HIV-1感染研究提供基础.