摘要：背景:非病毒载体因其安全性好而在基因治疗领域赢得了广泛的关注,各种各样的非病毒载体处在不断的研究中,壳聚糖季铵盐作为一种新的生物材料,同样也具有作为基因递送载体的潜质。目的:考察壳聚糖季铵盐体外基因转染活性,寻求一种新的非病毒基因载体递送系统。设计、时间及单位:对比观察实验,于2008-04/12在浙江省医学科学院生物工程所完成。材料:质粒pcDNA3.1-EGFP为浙江省医学科学院生物工程实验室保存。以3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵作为改性剂制备壳聚糖季铵盐,用复凝聚法制备载基因纳米粒。方法:凝胶阻滞实验分析壳聚糖季铵盐包裹质粒的能力,DNaseI的保护实验分析载基因纳米粒的抵抗核酸酶降解的能力,体外基因转染实验评价纳米粒的体外转染活性,用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪测定转染结果。通过考察转染液中有无牛血清和递送不同剂量的基因对转染效率的影响,寻求本递送系统较好的转染条件。另外,用MTT法测定壳聚糖季铵盐的细胞毒性。主要观察指标:壳聚糖季铵盐和pcDNA3.1-EGFP以何种比例结合形成的纳米粒、转染液中有无牛血清,质粒的量为多少时对人胚肾T细胞的转染效率是最高的;不同浓度的壳聚糖季铵盐对细胞生长的影响。结果:壳聚糖季铵盐纳米粒能转入人胚肾T细胞,虽然转染效率略逊于聚乙烯亚胺,但是细胞毒性明显小于聚乙烯亚胺。壳聚糖季铵盐纳米粒转染细胞72h后效率较高,经综合分析,当pcDNA质量为2μg,壳聚糖季铵盐和pcDNA以质量比为5结合形成的纳米粒,在无血清条件下对人胚肾T细胞进行转染,转染效率是最高的。结论:壳聚糖季铵盐纳米粒能将基因递送到细胞内,并且报告基因能在细胞内表达。因此,壳聚糖季铵盐用做基因递送的载体系统值得进一步的研究。

摘要：目的:明确骨髓间充质干细胞移植到关节软骨损伤处后,该处修复组织的细胞来源,以了解组织修复的过程。方法:实验于2006-01/2007-01在浙江省医学科学院生物工程所完成。①实验材料:3月龄新西兰大白兔,清洁级,体质量约2kg,由浙江省实验动物中心提供。②实验方法:利用兔性别决定基因序列设计两对PCR引物。取雄性新西兰大白兔进行骨髓间充质干细胞的分离培养与扩增。取雌性新西兰大白兔,暴露其膝关节软骨,用电钻钻孔造成膝关节软骨内侧直径4.5mm深3.5mm的全层关节软骨缺损,达软骨下骨。一侧植入骨髓间充质干细胞/胶原海绵,另一侧仅植入胶原海绵。③实验评估:于术后1,2,3,4,5个月取兔关节软骨缺损修复处组织提取总DNA,进行PCR扩增,鉴定移植物中是否存在性别决定基因,以明确细胞来源。结果:移植后1,2,3,4,5个月移植雄兔骨髓间充质干细胞及胶原海绵的关节修复处组织提取的DNA,用设计的引物通过PCR扩增出一条约200bp大小的条带,大小与阳性对照一致;而另一侧仅移植胶原海绵的关节软骨修复处组织提取的DNA,用设计的引物通过PCR扩增后未发现有条带。PCR扩增阳性样本测序分析显示,每个样本碱基序列一致,与GenBank上性别决定区Y基因组gb|AY785433.1|比较,扩增的样本序列与标准序列完全一致,序列同源性达100%。结论:雌兔关节骨髓间充质干细胞/胶原海绵复合物移植处的新生组织中含有雄性组织,提示新生软骨中有移植的雄性骨髓间充质干细胞分化来的软骨细胞。

摘要：目的 建立一种高敏感度的检测痕量单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）DNA的实时荧光定量PCR方法，为针对HSV-2潜伏感染的治疗性疫苗和抗病毒药物疗效提供一个评价方法。方法依据HSV-2糖蛋白D（gD）基因序列，使用序列比对软件，选取其保守区序列设计引物及TaqMan探针并进行筛选；以gD基因重组质粒pcDNA3-HSV-2gD作为标准模板，对该检测方法的反应条件进行优化，提高其检测特异性、敏感度和重现性。结果该检测方法特异性好，检测的最低拷贝数可达到2个拷贝，线性范围为2×10^0～2×10^8拷贝／反应，是普通PCR敏感度的10^3倍。该检测方法组间和组内变异系数均低于5％，说明该检测方法具有良好稳定性。结论本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法用于检测痕量HSV-2DNA具有特异、敏感、定量和重现性好的优点。

摘要：针对电气化铁路通信机房接地体的特殊运行环境受到的电磁干扰,设计了一套接地电阻在线监测系统。采用变频法测量接地电阻,将辅助电压极置于接地体与辅助电流极之间距离的0.59处,可以精确地测量接地电阻的大小,减少工作量;应用FIR滤波与FFT插值的抗干扰方案,使得沿线机房接地电阻在不断电的情况下实现精确的在线监测。应用该系统对电气化铁路通信机房接地电阻进行了现场实际测量,结果表明,该系统在电气化铁路强电磁干扰环境下能准确测量,可靠工作。