摘要：目的针对病毒核酸检测多个环节,以近年来广泛流行的新型冠状病毒为例,设计模拟可能产生误差的实验,旨在探讨影响病毒核酸检测过程中的影响因素,帮助检验人员细化操作、改善实验流程以及提高工作质量。方法用不同量的液体石蜡封盖反应孔,分析其对反应结果的影响;设计不同的反应体系并扩增,分析预分装试剂误差与排枪使用误差对结果的影响;反应体系在不同温湿度环境放置不同的时长后扩增,分析环境和等待时长对结果的影响。结果上海伯杰检测试剂的最佳液体石蜡封盖量为20μL,中山达安和江苏硕士检测试剂的最佳液体石蜡封盖量为15μL;2倍分装试剂和排枪吸样误差不影响定性实验阴性样本和阳性对照品的结果判读;上海伯杰检测试剂较中山达安和江苏硕世试剂更稳定,冷藏不应超过4h。结论实验室在遵循实验室能力认可准则进行性能验证的基础上针对实际工作情况对实验细节进行测试和比较,了解不同试剂在本实验室温湿度环境下的扩增表现和稳定性,从而优化检测步骤,提高工作质量。

摘要：目的用RNA干扰(RNAi)技术抑制CD147基因的表达,检测其对人结直肠癌细胞系HT29细胞增殖、侵袭和致瘤能力的影响。方法设计合成CD147特异性的RNA干扰表达质粒pYr-mir30-shRNA,稳定转染HT29细胞,分别获得HT29/shRNA-control和HT29/shRNA细胞;RT-PCR和western blot分别检测CD147、MCT1、MCT4 mRNA和蛋白质的表达;明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性;CCK8法分析细胞的增殖能力;Transwell小室检测细胞的侵袭能力;观察结直肠癌裸鼠皮下移植瘤的致瘤能力。结果与空白组比较,RNA干扰后的细胞中CD147、MCT1 mRNA(F分别为99.645和84.985)及蛋白质(F分别为73.675和19.842)的表达水平均降低(P均<0.01);MMP-2和MMP-9的活性均降低(P均<0.01);细胞增殖(t分别为7.491、15.023、14.584、6.637和11.211,P均<0.01)和侵袭(F=330.443,P<0.01)能力均降低,使裸鼠荷瘤能力下降(F=365.679,P<0.01)。结论 RNA干扰能有效抑制CD147基因的表达,抑制HT29细胞的增殖和侵袭能力。