摘要：目的通过建立一种较为简单灵敏的高分辨熔解曲线(HRM)方法,对CYP3A5单核苷酸多态性(SNP)位点进行测定,从而确定CYP3A5基因型,用于指导临床他克莫司的用药剂量。方法根据CYP3A5SNP位点基因组序列设计引物,利用HRM方法检测已知基因型标本,选取最佳引物,并通过同测序结果比对的方式确定该方法检测CYP3A5基因型的正确度、重复性以及灵敏度。结果利用该方法可以直接判断CYP3A5基因型,其检测结果与一代测序结果完全一致,重复性好、灵敏度高。结论 HRM方法可以用于CYP3A5基因型检测,为他克莫司的个体化用药提供可靠的评估依据。

摘要：目的建立实时荧光环介导等温扩增(Real-time Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP)技术检测皮肤癣的方法,实现皮肤癣菌病的快速实验室诊断。方法通过在NCBI官网查找下载皮肤癣菌中毛癣菌属、小孢子菌属和表皮癣菌属临床分离率较高的菌种rRNA序列(18S rRNA,ITS1,5.8S rRNA,ITS2和28S rRNA),运用DNASTAR Lasergene软件进行分析比对,寻找出毛癣菌属内高度保守的靶序列,且该段靶序列要与其他属存在差异,运用Primer Explorer V5设计LAMP引物。提取须癣毛癣菌NBRC6202基因组DNA作为模板筛选引物以及建立LAMP检测毛癣菌属的反应体系,以红色毛癣菌ATCC28188基因组DNA作为模板测试其敏感性和稳定性,以毛癣菌属以外的其他真菌、细菌基因组DNA验证LAMP反应体系的特异性。结果筛选的4套引物里,primer2的扩增效果较好,可在22 min检测出须癣毛癣菌,且可以特异地检测出红色毛癣菌、指间毛癣菌、疣状毛癣菌、许兰毛癣菌、紫色毛癣菌。本研究建立的毛癣菌属RT-LAMP检测方法的最低检测限为1 pg/μL;在10000 pg/μL、100 pg/μL和1 pg/μL三个浓度的分别10次重复检测实验中平均CT值和CV%分别为9.24±0.30,3.29%、10.57±0.54,5.12%、15.95±0.52,3.24%。结论实验建立的毛癣菌属LAMP检测方法在特异性、敏感性和稳定性三方面均表现出优越的性能,能快速准确地检测出毛癣菌属常见菌种,具有良好的临床应用前景。