摘要：参考GenBank发表的猪圆环病毒2型（PCV2）全基因组序列，设计2对引物，通过PCR技术扩增出2株PCV2流行株的全基因，并进行了序列测定分析．结果表明，2个分离株基因组全长分别为1767bp和1768bp，2个分离株之间的核苷酸相似性为97．3％，与GenBank上已发表的PCV2分离株之间的相似性为93．8％-99．3％．2个分离株的ORF2核苷酸序列相似性分别为91．3％-99．6％和90．6％-98．0％，存在一定的变异．

摘要：根据GenBank中公布的Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒和实验室分离到的Ⅰ型鸭病毒性肝炎ZJ株、Ⅰ型鸭病毒性肝炎R株所测序列（GenBank登录号分别为EU841005和EF585200）以及新型鸭肝炎病毒全基因组序列，应用PrimerPrimier5．0软件，在序列保守区域分别设计了2对鉴别引物，成功建立了Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒和新型鸭肝炎病毒的鉴别RT—PCR检测方法。结果表明：该方法能从Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒中扩增到与预期相符的471bp条带，从广东佛山分离到的新型鸭肝炎病毒FS株中扩增到705bp的条带，设计的2对引物能够特异性地检测出Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒和新型鸭肝炎病毒，特异性好；分别能够检测出模板含量为0．8ng／μL和1．0ng／μL的Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒和新型鸭肝炎病毒。因此，该方法可用于Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒和新型鸭病毒性肝炎临床样品的鉴别诊断和分子流行病学调查。

摘要：参考GenBank发表的猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）全基因组序列,设计引物,通过PCR技术,从广东地区疑似＂高热病＂病猪的组织中,扩增17株PCV2流行株的全基因,并进行了序列测定分析.结果表明,17个PCV2分离株基因组全长为1 767或1 768 bp.相似性比较发现,17个分离株之间的核苷酸相似性为96.7%-99.8%,与GenBank上已发表的国外分离株比较,相似性为95.6%-99.8%;17个分离株ORF2、ORF3的核苷酸相似性分别为89.5%-100%和97.5%-100%;系统发育树显示,17个毒株有2株属于a亚群,10株属于b亚群,5株属于d亚群.

摘要：将采集的广东某猪场疑似猪高热症病料处理后接种于Marc-145细胞,出现细胞聚集、固缩、脱落等特异性细胞病变。根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因序列设计并合成针对NSP2、ORF3和ORF5基因的引物,扩增目的基因并测序分析。结果表明:分离毒株XH-GD株PRRRSV属于美洲型,且NSP2基因发生30个氨基酸的不连续缺失;XH-GD的NSP2、ORF3和ORF5基因与HUB1、NX06、BJsy06、VR-2332、HB-1(sh)2002、HB-2(sh)2002、CH-la和RespPRRS MLV等毒株等位基因的核苷酸同源性分别为83.3%-98.9%、88.6%-99.2%、88.1%-99.2%,推导的氨基酸同源性分别为76.8%-98.3%、83.7%-98.8%、88.1%-99.2%;而与LV的等位基因核苷酸同源性分别为52.9%、65.0%和64.3%,推导的氨基酸同源性分别为31.3%、57.5%和58.9%。基因系统发育树分析表明,XH-GD与NX06、BJsy06株的亲缘关系很近,与HUB1、NX06、BJsy06、VR-2332、HB-1(sh)2002、HB-2(sh)2002、CH-la和RespPRRS MLV亲缘关系较近,与LV毒株处于不同的分支。

摘要：根据GenBank已发表的猪圆环病毒2型（PCV2）全基因组序列，设计2对特异性引物，对广东省不同地区规模化猪场采集的疑似断奶仔猪多系统消耗综合征（PMWS）组织病料进行了PCV2全基因组克隆和序列分析．结果表明，PCV2核苷酸序列较稳定，不同地区6个PCV2毒株全基因组序列均由1767bp组成，彼此间核苷酸序列相似性达95．3％～99．8％，亲缘关系密切；与GenBank已发表的国内不同地区PCV2参考毒株的相似性介于70．1％-99．1％；与欧洲各地区毒株的相似性介于67．7％～98．8％；其中与美国的毒株（AY094619）差异性最大，介于69．4％-70．8％之间．

摘要：根据GenBank中的I型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因的引物,用该特异性表达引物从I型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1、3D,用相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,转化宿主BL21(DE3),用不同浓度的IPTG诱导VP1、3D基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明,VP1、3D在大肠杆菌中表达量较高,表达产物的分子量约为48kD、68kD,并能被兔抗DHV-1血清所识别。I型鸭肝炎病毒VP1、3D蛋白在大肠杆菌中表达产物具有免疫原性。

摘要：参照GenBank上收录的基因组序列自行设计引物,分别扩增猪圆环病毒2型ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5。将外源基因分别插入经改造的杆状病毒穿梭载体pFVC,获得3种重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2。将重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2分别转入带有杆状病毒骨架的***感受态细胞中。提取高质量的重组质粒rBacmid-ORF2、rBacmid-ORF5、rBacmid-ORF5-ORF2,将重组质粒转染Sf9细胞,获取重组病毒rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2。通过间接免疫荧光检测证实了外源基因正确表达。重组杆状病毒rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2对BALB/c小鼠的免疫试验结果显示,rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2均能够刺激小鼠机体产生免疫应答,产生抗体,并能持续较长时间。

摘要：参照GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)XH-GD株ORF6(M蛋白)基因序列,设计合成了一对引物,扩增PRRSV ORF6基因。将该基因克隆于转移质粒载体pFcDNA3.1(+)中,获得重组转移质粒pFcDNA3.1-ORF6并将其转化DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒Bacmid-ORF6,再将其转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBacmid-ORF6,经PCR鉴定证实目的基因正确地插入到杆状病毒基因组的CMV启动子下游;经过间接免疫荧光试验(IFA)检测,M蛋白在Sf9细胞中得到了表达,而且表达的产物具有特异免疫学反应性。

摘要：本试验参考GenBank中已公布的新型鸭肝炎病毒全基因组序列,应用Primer Premier 5.0软件,在序列保守区域分别设计了7对引物,通过RT-PCR方法对本实验室已鉴别纯化的新型鸭肝炎病毒FS株进行了分段扩增,经过测序拼接整理,获得FS株全基因组序列(GenBank中登录号为EU877916)。序列分析表明,FS株全长7792个碱基,一个大的开放阅读框编码2251aa。将各基因与国内外已发表的新型鸭肝炎病毒参考毒株进行相似性分析,结果表明,与G株(GenBank登录号为EU755009)核苷酸相似性最高,为99.2%,而FS株与G株和C-GY株(GenBank登录号为EU352805)的氨基酸相似性最高,均为99.6%,与DHV-HS株和DHV-HSS株的相似性最低,均为83.6%。系统发育树分析发现,与G株亲缘关系最近。

摘要：根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列,应用Primer 5.0分析软件设计合成了扩增I型鸭肝炎病毒3D基因的一对引物,用该特异性表达引物体外克隆Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒3D基因,构建重组表达质粒pET32a-3D,将此重组质粒转化到受体菌RossetaⅡ(DE3)中进行诱导表达。SDS-PAGE和蛋白质印迹分析表明,诱导4 h后表达量达到最高,表达产物大小约为70 Ku,表达蛋白能与I型鸭病毒性肝炎阳性血清产生特异性免疫反应。