摘要：根据GenBank中同类蛋白序列设计特异PCR引物,从2株创伤弧菌Vibrio vulnificus和1株河弧菌Vibriofluvialis中扩增出热休克蛋白70(heat shock protein,hsp70)基因片段。对这3个片段进行克隆、测序和分析的结果表明,3个片段长均为1 911 bp,包含完整的hsp70 ORF,编码636个氨基酸。它们的氨基酸序列与GenBank中其它物种hsp70的氨基酸序列比较发现,2株创伤弧菌hsp70基因序列和同种其它菌株的同源性高,达98%以上;而河弧菌的hsp70序列属首次克隆;与多种原核和真核生物的hsp70氨基酸序列一起构建了系统进化树,结果支持传统的分类结果。

摘要：根据嗜水气单胞菌外膜蛋白基因ompTS的核苷酸序列设计引物 ,运用聚合酶链式反应 (PCR)扩增出与预期大小相符的基因片段。将此基因片段克隆至质粒pRSETA的BamHI和EcoRI位点 ,构建重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导获得高效表达 ,SDS PAGE蛋白电泳表明在 39 9kD处出现超强特异带 ,占总蛋白的5 1%。以Ni NTA Conjugate抗体进行Westernblot分析证明该 39 9kD的蛋白为所表达的融合蛋白。纯化融合蛋白注射雄性新西兰大白兔可诱导产生特异抗体。ELISA和Westernblot检测结果显示 ,该抗体与表达的融合蛋白和从嗜水气单胞菌中提取的 36 9kD外膜蛋白均呈阳性反应 ,表明所表达的融合蛋白仍保持原有外膜蛋白的免疫原性 。

摘要：用基因融合方式 ,以嗜水气单胞菌基因组DNA为模板 ,设计引物通过聚合酶链式反应 (PCR)把去除部分毒性活性编码区的细胞毒肠毒素基因 (act)与去除信号肽的外膜蛋白基因 (OmpTS)连接一起 ,两基因之间插入一个link er(Gly4Ser) 3 经BamHⅠ和HindⅢ双酶切 ,得到 2 .1kb的双基因融合片段 ,克隆于表达质粒pQE 30中 ,构建了双基因重组表达载体pQE30 /act GS ompTS ,转化大肠杆菌M15 (pREP4 ) ,经IPTG诱导 ,表达出预期大小 (81.0kD)的融合蛋白Act GS OmpTS ,此蛋白占菌体总蛋白的 4 2 %。Westernblot检测结果显示 ,该蛋白与抗Act兔血清和抗OmpTS兔血清都呈阳性反应 ,表明融合蛋白保留了外毒素和外膜蛋白的反应原性 。