摘要：定点饱和诱变技术一直以来被广泛应用于蛋白的定向进化和代谢途径的研究,然而建立偏爱性低的高质量饱和突变库一直面临着严峻挑战.提出一种改进的建立智能突变体文库的方法,选取柠檬烯环氧水解酶(LEH)为突变对象,摒弃传统的NNK/NNN密码子简并引物,采用半理性设计突变氨基酸的方法,将PCR反扩载体与T5介导的克隆方法联用,构建一个随机的四点组合突变体库,突变效率高达81. 25%.此外,突变库的偏爱性大大降低,突变氨基酸的分布趋于平均,表现出低测序倍数基础上的高覆盖率.因此该方法极大提高了突变库的质量,降低了筛选成本,为蛋白质工程和生物合成的研究提供了好的思路.

摘要：目的了解2型糖尿病患者对糖尿病视网膜病变(DR)的认知状况及其与DR严重程度之间的相关性。设计横断面调查。研究对象2012年12月-2013年4月于北京德胜社区卫生服务中心糖尿病眼病门诊(80例)和北京同仁医院眼病会诊中心(34例)首诊的2型糖尿病患者114例。方法对上述患者进行问卷调查,包括一般信息、糖尿病及其治疗情况和糖尿病眼病相关知识。对患者进行散瞳眼底检查,以病变较重眼确定患者DR严重程度,分析患者对DR的认知状况与DR严重程度的相关性。主要指标不同来源患者对DR相关知识的认知比率。结果社区来源患者中,DR患病率21.3%,其中增生期糖尿病视网膜病变(PDR)占6.3%;医院来源患者中,DR患病率100%,其中PDR占85.3%;比社区来源者明显高(P=0.0042)。社区来源和医院来源患者人群中,知道糖尿病影响视力者分别为91.3%和41.2%(OR=21.95,95%CI:3.33～144.75,P<0.001),知道糖尿病可导致双眼失明的分别为90.0%和17.7%(OR=44.88,95%CI:6.64～303.37,P<0.001),知道糖尿病患者需定期进行眼科检查的分别为83.8%和14.7%(OR=78.34,95%CI:7.44～824.42,P<0.001),知道DR的分别为81.0%和14.7%(OR=46.77,95%CI:6.02～363.52,P<0.001),知道DR可防可治的分别为46.8%和5.9%(OR=5.82,95%CI:0.84～40.41,P=0.046),内科医生建议眼科检查的分别为71.8%和27.3%(OR=9.74,95%CI:1.79～52.96,P=0.003)。糖尿病无视网膜病变患者(DWR)在是否知道糖尿病影响视力、糖尿病可导致失明、需要定期检查眼部及是否知道DR的问题上的认知率均高于DR患者(P均<0.05)。背景期DR(BDR)患者在是否知道糖尿病影响视力、糖尿病可导致失明、需要定期检查眼部、是否知道DR及DR可防治的问题上的认知率高于PDR患者(P均<0.05)。结论糖尿病患者人群对DR的认知程度不足,医院来源比社区来源患者对DR的认知更差、病情更严重,提示加强对糖尿病患者人群的健康教育,提高对DR防治的认知程度,对于降低DR对患者视功能的严重损害至关重要。