摘要：目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)多表位基因的在原核载体中的克隆、游离表达及其产物的抗原性。方法:设计、并合成HBV多表位抗原基因BPT,克隆入原核表达载体pBAD/gIIIA,进而转化Top10大肠杆菌,阿拉伯糖诱导表达出HBV多表位抗原蛋白(B-BPT),并用Western blot方法初步检测该抗原蛋白的抗原性。结果:成功构建了原核表达载体pBAD/BPT,在大肠杆菌中表达出HBV多表位抗原蛋白B-BPT,Western blot检测显示该蛋白具有良好抗原性。结论:HBV多表位抗原基因的设计是成功的,其在大肠杆菌中表达的非融合蛋白具有良好的抗原性,可能是较理想的HBV治疗性疫苗候选物。

摘要：背景：晚期肝病患者的肺内血管异常可以导致肺内右向左分流及严重低氧血症，目前国内对筛查肺内血管扩张尚缺乏一种简便、敏感、有效的方法。目的：评估对比增强超声心动图对晚期肝病肺内分流的临床诊断价值。设计、时间及地点：前瞻性病例对比观察，于2004-02／2006-02在解放军第四五八医院肝病中心完成。对象：解放军第四五八医院肝病中心收治的男性拟行肝移植的晚期肝病患者24例。方法：在无任何血管扩张药治疗情况下例行常规检查。采用对比增强超声心动图筛查晚期肝病患者肺内右向左分流的发生率，并根据左心室微泡的显示程度半定量分析记录为1^＋～3^＋。将患者分为经超声心动图证实有肺内分流组和无肺内分流组。主要观察指标：拟行肝移植的晚期肝病患者肺内右向左分流的发生率及临床特点。结果：①24例患者中10例（41．7％）经对比增强超声心动图证实肺内右向左分流，左心室显影异常程度1^＋～2^＋，其中6例1^＋，4例2^＋，出现在右心室显影后6～10余个心动周期。②两组患者的年龄、性别、动脉血气分析指标、肝功能指标差异无显著性意义（P〉0．05）。③经超声心动图证实肺内分流组患者的上消化道出血发生率、门脉高压指征脾脏厚度及右心功能参数肺动脉收缩压、Tei指数均高于无肺内分流组（P〈0．05～0．01）。结论：晚期肝病合并肺内分流而无低氧血症时肺血管扩张比较常见，对比增强超声心动图为诊断肺内血管扩张提供了一种敏感、非创伤的早期检查手段。门脉高压症是发生肺内血管扩张的主要因素，右心室Tei指数可作为评估肺内血管扩张患者右心功能的重要参数。

摘要：目的:构建以人抗乙肝表面抗原（HBsAg）单链抗体（ScFv）为导向作用,白细胞介素-2（IL-2）为治疗作用的融合蛋白原核表达载体pQE 40/ScFv-IL-2。方法:应用PCR技术将抗HBsAg单链抗体与白细胞介素-2在分子水平上进行基因重组,构建中间载体pGEM7Zf（+）/ScFv-IL-2,经酶切鉴定及序列测定正确后,将目的基因片段克隆到pQE 40表达载体中,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达。结果:SDS-PAGE结果显示在相对分子质量约4.3×104Da处,可见蛋白表达带。以鼠抗人IL-2单克隆抗体经免疫印迹验证,该表达蛋白为所设计的融合蛋白。结论:融合蛋白ScFv-IL-2的成功构建及表达,为融合蛋白的纯化和研究开发新型的乙肝导向治疗的基因工程药物打下良好的基础。

摘要：在P .pastoris中分泌表达非融合抗HBsAg单链抗体 (HBscFv)。设计引物从pGEM HBscFv上扩增目的基因 ,亚克隆至P .pastoris表达载体pPICZαA中 ,线性化后转化P .pastorisGS115 ;转化子经菌落PCR、高浓度Zeocin抗性筛选鉴定后 ,甲醇诱导目的蛋白表达。结果发现 ,重组HBscFv可以在α因子的引导下 ,分泌至培养基中 ,产量为80mg L ;分泌至培养基中的HBscFv具有结合HBsAg活性 ,活性总量在诱导培养 72h后达最高峰 ,在诱导培养后期 ,HBscFv活性下降 ;PAS糖显色结果表明 ,酵母表达HBscFv是一种低糖基化蛋白或非糖基化蛋白。

摘要：为了从巴氏毕赤酵母中获得分泌表达的非融合人源抗HBsAg单链抗体 (HBscFv ) ,设计引物从pGEM HBscFv上扩增HBscFv,亚克隆至P pastoris表达载体pPICZαA中 ,然后转化P pastorisGS115、KM71,菌落PCR、高浓度Zeocin抗性筛选鉴定转化子 ,甲醇诱导目的蛋白表达并对其性质进行鉴定。结果发现 ,3%～ 5 %的转化子具有 2 0 0 0mg/LZeocin抗性 ;转化子诱导后 ,可以合成并分泌相对分子质量为 32 0 0 0的HBscFv ,表达量占酵母培养上清中总蛋白的 2 2 % ;酵母表达产物可被针对大肠杆菌来源HBscFv的单克隆抗体特异性识别 ,并具有结合HBsAg活性。

摘要：目的构建以人HBsAg单链抗体(HBScFv)为导向作用、α干扰素为治疗作用的融合蛋白酵母表达载体pPICZ-αB/ScFv-IFN-α。方法通过重叠PCR构建目的蛋白质基因,再亚克隆到酵母表达载体pPICZαB中,DNA测序后,转化巴氏毕赤酵母宿主菌GS115 ,菌落PCR、高浓度Zeocin抗性筛选鉴定重组酵母,重组酵母经甲醇诱导后,通过SDS PAGE分析鉴定表达产物。结果DNA测序结果显示构建的目的基因片段(HBScFv IFN-α)的序列与原设计序列相符合;菌落PCR结果显示目的基因已整合到酵母菌中;诱导表达后,SDS PAGE结果显示在相对分子质量约4 4 0 0 0处可见目的蛋白质表达带。

摘要：以邻苯二甲酸醋酸纤维素为成球材料、促肝细胞生长素为球心物，制备工艺经均匀设计优化，制得类白色粉末状微球。高效液相色谱（HPLC）测得微球包封的药物图谱与促肝细胞生长素的HPLC图谱一致。微球载药量量29．7±2．5％，平均粒径127um。微球在人工胃液中2h释药不超过10％，在人工肠液中2h，释药100％。微球给大鼠灌胃后，HPLC测得大鼠血中促肝细胞生长素浓度在2．5h最高。