摘要：目的利用EspA(肠出血性大肠杆菌O157:H7Ⅲ型分泌蛋白A)作为融合伴体分子,构建一种高效原核融合表达载体。方法在EspA的羧基端设计一Linker,包括柔韧区,肠激酶酶切位点和多克隆位点。PCR分别扩增EspA、Linker基因,利用重叠延伸PCR技术获得二者融合基因,T-A克隆后插入表达载体pET-28a(+),构建高效原核表达载体-pEspA。分别将IL-24、GFP等六种基因克隆入pEspA,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达,SDS-PAGE检测融合蛋白。以EspA单克隆抗体亲和层析柱纯化融合蛋白,融合蛋白经肠激酶酶切后再通过Ni2+亲和层析柱获得外源蛋白。分别利用MTT法和紫外光激发实验鉴定IL-24、GFP生物学活性。结果构建的表达载体pEspA可高效表达外源目的蛋白,使本身不表达或表达量低的目的蛋白获得高效表达。先以EspA单克隆抗体亲和层析一步纯化获得高纯度的融合蛋白,融合蛋白经肠激酶酶切后再以Ni2+亲和层析柱获得了外源蛋白,同时生物学活性实验显示纯化的IL-24、GFP具有较好的生物学活性。结论成功构建了基于EspA的新型高效原核融合表达载体,为蛋白的融合表达及纯化又提供了一种可供选择的工具。

摘要：科研素养是适应终身学习与社会发展的必备品质。培育高中学生的科研素养有利于促进中高等教育间的有效衔接,为国家培养创新型人才。本文首先分析了高中生科研素养要素体系,以人教版地理教科书“问题研究”栏目为载体,创设科研素养指引下的地理问题研究路径,并以“实体商店何去何从”为例,选取广州市实体书店作为研究对象,通过课前准备、课中探究、课后调查、课堂汇报四个环节开展研究活动,以此展示科研素养培育融入高中地理教学的具体过程。

摘要：路面结构在车辆荷载和外界环境作用下,其使用性能会不断衰减。为了进一步分析路面结构内部温度受外界环境的影响,本文研究了热传导理论,采用有限元软件模拟了路面温度场。研究发现,路面结构内部温度变化规律与气温变化规律具有一致性,随着路面深度增加,温度变化不明显,面层结构受温度影响最大。

摘要：路面结构在车辆荷载和外界环境作用下,其使用性能会不断衰减。为了进一步分析路面结构内部温度受外界环境的影响,本文研究了热传导理论,采用有限元软件模拟了路面温度场。研究发现,路面结构内部温度变化规律与气温变化规律具有一致性,随着路面深度增加,温度变化不明显,面层结构受温度影响最大。

摘要：公路的路基肩负着承载公路自身重力以及路面行车重力的艰巨任务,路基的施工质量将直接决定公路工程的整体质量,并对其使用功能造成巨大影响。因此,在公路工程建设中,我们务必要做好公路路基的施工管理,保证并控制好路基施工中每一道工序的施工质量,比如路基填料、混凝土浇筑、路面压实等等。本篇文章主要针对公路工程施工中的路基路面压实技术作主要分析与论述。