摘要：目的:探讨RNA干扰技术抑制Survivin基因表达对增强人喉癌HEP-2细胞化疗药物敏感性。方法:针对Survivin mRNA序列设计合成小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pRNAT-Survivin重组表达载体,转染人喉癌HEP-2细胞;通过RT-PCR和Western blot分析其对HEP-2细胞内源性Survivin表达的影响;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察HEP-2细胞对化疗药物5-FU和优福定敏感性的改变。结果:成功构建pRNAT-Survivin重组质粒,并成功转染HEP-2细胞;RT-PCR和Western blot结果证实重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制Survivin基因表达(P<0.01);MTT及流式细胞仪结果证明在5-FU和优福定联合作用下,pRNAT-Survivin组HEP-2细胞的生长抑制率明显增高(P<0.01)。结论:pRNAT-Survivin可抑制Survivin在人喉癌HEP-2细胞中的表达,并增强HEP-2细胞对化疗药物敏感性。

摘要：目的:观察RNA干扰技术沉默Cyr61基因表达对人喉癌Hep-2细胞生物学行为的影响。方法:针对Cyr61mRNA的序列设计合成小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pRNAT-Cyr61重组质粒,转染人喉癌Hep-2细胞;RT-PCR和Western blot检测其对Hep-2细胞内源性Cyr61表达的影响;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察Hep-2细胞体外增殖活性变化;Transwell小室法检测Hep-2细胞体外侵袭能力的改变;流式细胞仪检测Hep-2细胞凋亡。结果:pRNAT-Cyr61重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制Cyr61基因表达,抑制率分别最高达到74.62%和78.43%;Hep-2细胞的体外生长抑制率最高达68.22%,侵袭细胞数下降至(44.00±2.35)个;Hep-2细胞凋亡率最高达52.98%。结论:pRNAT-Cyr61可抑制Cyr61在喉癌Hep-2细胞中的表达,并抑制细胞的增殖活性和侵袭能力,促进细胞凋亡。