摘要：目的:建立基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)的蕲蛇快速检测方法,实现中药蕲蛇的可视化快速鉴定。方法:依据《中华人民共和国药典》收录的蕲蛇特异性序列设计4条LAMP引物(2条内引物、2条外引物),建立蕲蛇LAMP的鉴别方法,对比《中华人民共和国药典》收录的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)方法的检测结果,评价LAMP的鉴别方法的特异性和灵敏度,并采用LAMP鉴别方法和PCR方法鉴别市售蕲蛇的真伪。结果:使用该引物建立的蕲蛇LAMP鉴别方法对蕲蛇对照药材和4份市售蕲蛇样本产生扩增,对1份市售蕲蛇样本和8种蕲蛇混淆品样本无扩增,与PCR鉴别结果一致,说明蕲蛇的LAMP鉴别方法具有良好的特异性。LAMP检测的灵敏度在DNA水平上达到0.004 ng·μL^(-1),PCR检测的灵敏度为0.4 ng·μL^(-1),因而LAMP检测具有较高的灵敏度。结论:本研究建立的LAMP检测方法可以应用于中药材蕲蛇真伪的快速鉴别。

摘要：旨在建立川贝母的快速真伪鉴别方法。比较分析川贝母保守性序列及其常见伪品的序列差异,设计了3套LAMP引物,评价了其特异性和灵敏度;利用该技术对市售川贝母样品进行检测,同时用《中华人民共和国药典》的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)进行验证。结果表明,三套LAMP引物中,只有加了碱基突变的Set3的引物特异性强;使用Set3引物建立的川贝母LAMP检测方法在川贝母、暗紫贝母和太白贝母样品中显示阳性,在伊贝母、浙贝母、湖北贝母、平贝母等7种常见混淆品中显示阴性,方法特异性良好;LAMP检测的灵敏度在DNA水平上达到32μg/L。采用此LAMP方法进行了30份市售川贝母样品的鉴定,本法实验结果与药典收录的PCR-RFLP法实验结果一致。建立的川贝母LAMP快速鉴别法适用于川贝母及其常见伪品的真伪鉴别。