摘要：为了建立鹿人五毛滴虫巢式PCR检测方法并进行验证,根据人五毛滴虫18S r RNA基因的特异性片段设计巢式PCR特异性引物,对两轮PCR反应的退火温度和反应体系中Mg2+浓度进行探索和优化,在此基础上,进一步通过灵敏性和特异性的检测。采用建立的巢式PCR检测方法对68份鹿粪便样品进行检测。结果表明,建立的巢式PCR方法,第一轮PCR最适退火温度为53℃,第二轮PCR最适退火温度为53℃;镁离子浓度为2.5 mmol·L-1。对鹿人五毛滴虫的检测精度可达每毫升10个虫体DNA;对犬贾第虫、阴道毛滴虫、弓形虫、柔嫩艾美尔球虫、大肠杆菌、旋毛虫基因组DNA的扩增的结果均为阴性;68份鹿粪便样品鹿人五毛滴虫的检出率为50%。由此可见,建立的巢式PCR检测方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于鹿人五毛滴虫感染的临床检测。