摘要：研究犬乳腺恶性肿瘤p53基因在体内的表达,探讨其与犬乳腺肿瘤恶性程度的相关性。根据GenBank中犬p53基因序列以及文献报道的高度保守区域,设计1对引物,同时以GAPDH基因序列作为内参,将临床采集的犬乳腺肿瘤组织进行p53基因PCR检测,分析p53基因的表达量变化趋势。结果表明,良性肿瘤组织p53基因的表达量极小;恶性肿瘤组织中的表达量随着其恶化程度明显增高。由此可推断,检测p53基因的表达量可作为诊断犬乳腺肿瘤、判断肿瘤恶化程度及预后的一个重要指标。

摘要：目的克隆鸡破骨细胞分化因子(chODF)基因,并对其进行序列测定和分析。方法根据GeneBank报道的预测的鸡ODF基因(GeneBank登录号,XM425625)序列,设计引物。从鸡胚额骨分离培养的成骨细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA,用SOE-PCR的方法扩增鸡ODF基因全序列。将获得的预期大小的PCR产物插入pMD18-T克隆载体,转化***感受态细胞,提取质粒,进行双酶切鉴定,对含有目的片段的克隆进行序列测定。结果从成骨细胞中成功地克隆鸡ODF基因片段,其结果与GeneBank上报道的预测序列具有很高的相似性,达到99.3%,与人、小鼠、犬的一致性分别为55.4%、52%和55.7%,提示该基因在进化过程的保守。ODF基因全长1203bp,其阅读框起始于第一个氨基酸,终止于最后一个氨基酸,无信号肽,共编码400个氨基酸。结论ODF作为惟一能够直接诱导破骨细胞分化和功能的细胞因子,对它的深入研究可为探讨骨质疏松等代谢性骨病的发病机制及预防、治疗开辟出广阔的领域。

摘要：为制备蛋鸡TRPV6蛋白多克隆抗体,根据其基因序列,设计1对特异性引物,以卵巢组织中提取的总RNA为模板,扩增蛋鸡TRPV6基因1 801～2 176nt的375bp序列,构建原核表达质粒pET-32a(+)-TRPV6;将重组质粒转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达TRPV6融合蛋白,通过镍离子螯合柱纯化后免疫新西兰大白兔,获得兔抗鸡TRPV6多克隆抗体,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法和Western blot检测抗体的效价和抗体特异性。结果表明,试验成功构建原核表达载体pET-32a(+)-TRPV6,SDS-PAGE蛋白电泳检测发现目的蛋白大小约35 000;Western blot分析显示,表达的TRPV6融合蛋白具有良好的免疫原性,其抗体可与大肠杆菌表达的产物特异性结合;ELISA显示其抗体效价达1∶100 000。获得纯化的融合蛋白和多克隆抗体对研究TRPV6钙离子通道在蛋鸡髓质骨形成的作用机理具有重要作用。

摘要：建立犬细小病毒聚合酶链式反应(PCR)检测方法,并应用于临床诊断。根据犬细小病毒基因保守序列设计一对特异性引物,扩增目的片段大小为448bp。用此引物扩增疫苗中的犬细小病毒和37份病料中的犬细小病毒,并与胶体金诊断试剂盒相对比。实验结果显示:该方法能从疫苗中和临床病料中扩增出犬细小病毒目的基因片段,与胶体金诊断试剂盒相比能克服免疫血清学诊断中的非特异性反应,具有快速、准确、灵敏度高的优点,完全适用于犬细小病毒病的临床诊断。

摘要：背景:青年期蛋鸡在性成熟前形成髓质骨,体内雌激素水平的升高对骨代谢有直接的影响。目的:观察外源性17β-雌二醇对青年期ISA蛋鸡骨代谢的影响。设计、时间及地点:随机分组设计、动物对照观察,于2007-10/2008-02在南京农业大学动物医学院畜禽骨骼生物学实验室完成。材料:92日龄青年期ISA蛋鸡180羽。17β-雌二醇由美国Cayman公司提供,玉米油为国产分析纯。方法:180羽蛋鸡按随机数字表法分成3组,空白对照组、溶剂对照组、雌激素组,每组60羽。空白对照组蛋鸡,不做任何处理;溶剂对照组为每天肌肉注射玉米油1mL,雌激素组为每天肌肉注射2g/L17β-雌二醇玉米油溶液1mL。两组均注射20d。主要观察指标:于实验第0,5,10,15,20天,每组取12只鸡翼静脉采血5mL,用半自动生化分析仪测定血Ca、P和碱性磷酸酶活性。分光光度计测定抗酒石酸酸性磷酸酶活性。采用放射免疫法,运用智能放射免疫γ测量仪测定血浆雌二醇与睾酮。每个时间点取血后,麻醉后处死,取股骨中段样本,厚度为4mm,置于扫描仪上直接扫描后,运用ImageJ图像处理系统分析扫描图像,计算皮质骨厚度、皮质骨面积和皮质骨面积比例、皮质骨骨内径、皮质骨骨外径。结果:从实验第5天开始,雌激素组雌二醇显著高于空白对照组和溶剂对照组,睾酮水平显著低于空白对照组和溶剂对照组,差异有显著性意义(P0.05)。雌激素组皮质骨厚度、皮质骨面积、皮质骨面积比例、骨内径及骨外径与空白对照组和溶剂对照组比较,差异均无显著性意义(P>0.05)。结论:外源性雌激素能够促进青年期蛋鸡骨形成,抑制骨吸收,促进骨骼发育。

摘要：根据Genebank上登录的鸡的myostatin基因cDNA全长序列以及成熟肽序列设计一对引物,并分别在两引物前设计两个酶切位点EcoRⅠ和KpnⅠ,克隆岭南黄鸡肌肉生长抑制激素的成熟肽蛋白编码基因,然后将特异性片段连接到pMD18-T载体,经酶切、PCR鉴定后,构建了岭南黄鸡真核单纯表达载体pPICZαA-MSTN-m,经测序鉴定,结果表明所克隆的myosta-tin成熟肽基因与Genebank上发表的鸡(AF019621)、猪(AY208121)和家鹅(AF440862)的MSTN-m核酸序列同源性分别可达到99%、92%、86%,但翻译后的成熟蛋白氨基酸序列与鸡、猪和家鹅的同源性可以分别达到100%、99.1%及99.1%。

摘要：根据发表的犬瘟热病毒(CDV)参考毒株Onderstepoort的序列设计了一对引物,以感染犬瘟热病毒的犬的粪便总RNA为模板,RT-PCR扩增出17株CDV的H全基因1877bp的片段,将这个片段连接到pGEM-Teasy载体上,经酶切鉴定得到阳性克隆,将阳性质粒进行序列测定,并与国内外毒株进行同源性比较和系统发育分析,结果显示17株均为Asia-1型。北京地区流行的毒株主要是America-1型和Asia-1型,其中2007年主要流行America-1(疫苗型),而2008年主要是Asia-1型。