摘要：目的 构建Survivin shRNA重组干扰质粒。方法 设计并构建针对4个靶点的Survivin shRNA重组干扰质粒,并转染至A549细胞,qRT-PCR、Westen blot检测Survivin表达。结果 4个PGP-U6-GFP-neo-survivin-shRNA质粒中Survivin mRNA及蛋白水平均明显降低,其中PGP-U6-GFP-neo-survivin-shRNA-2质粒中Survivin表达更低。结论 成功构建了4个PGP-U6-GFP-neo-survivin-shRNA质粒。

摘要：背景肿瘤坏死因子(TNF)在体外能诱导某些正常细胞和大多数肿瘤细胞株(包括Hela细胞株)凋亡,其凋亡发生机制与细胞周期的关系中尚有许多问题需要探讨。目的研究细胞周期时相对TNF诱导Hela细胞凋亡的影响。设计非随机非对照实验研究。地点和对象实验在广东医学院生物化学与分子生物学研究所完成,对象为重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α,Sigma产品),Hela细胞株引自中国科学院上海细胞生物研究所。干预通过胸腺嘧啶核苷酸(TdR)阻断法阻滞Hela细胞的细胞周期,采用MTT法、流式细胞术和荧光染色分析TdR阻滞细胞和周期化的Hela细胞对TNF诱导凋亡的敏感性。主要观察指标TNF诱导TdR阻滞和周期化Hela细胞凋亡数。结果TdR阻滞细胞周期较周期化的Hela细胞对TNF诱导凋亡的敏感性降低。结论TNF诱导Hela细胞凋亡与细胞周期有关。

摘要：目的应用改良3′ cDNA末端快速扩增PCR法(rapid amplification of cDNA ends,RACE)筛选扇贝抗菌肽基因。方法设计M13和T7启动子分别修饰的基因特异性引物(gene special primer,GSP)、锚定引物,提取扇贝血淋巴总RNA进行改良3′ RACE和5′ RACE,获得cDNA准全长序列并在GenBank中进行同源性比较。结果从扇贝血淋巴中获得3个cDNA的3′端序列基因和1个准全长cDNA(544bp),在GenBank中未发现与之高度同源的基因。结论从扇贝血淋巴中获得的1个准全长cDNA、3个cDNA的3′端序列可能属于新基因。应用改良3′ RACE能钓取含抗菌肽保守序列的新基因片段,该方法可行。

摘要：目的应用改良5′cDNA末端快速扩增聚合酶链反应(RACE)筛选扇贝抗菌肽基因,寻找基于基因序列同源性的双壳类抗菌肽(AMP)的筛选方法。方法 TRIzol法提取扇贝血淋巴中总RNA。根据贻贝抗菌肽的保守序列设计基因特异性简并引物,进行改良5′RACE钓取可能防御素基因cDNA的5′端序列、AT克隆、DNA测序和同源性分析。结果采用改良5′RACE从扇贝血淋巴RNA中得到多个未知基因的cDNA 5′端序列,挑选600bp以下的基因片段进行AT克隆和DNA测序后得到3个插入片段序列,其长度分别为257、275和511bp。通过BLAST程序搜索GenBank核酸数据库,未发现与之高度同源的基因。结论从扇贝血淋巴中获得的3个5′端cDNA序列可能属于新的基因。应用改良5′RACE能钓取含防御素保守序列的新基因片段,由此表明此方案具有可行性。

摘要：分子生物学检验技术是医学检验专业重要的专业课程,实验教学尤其是综合性实验的教学对学生综合技能的培养至关重要。本文从实验设计思路、组织实施、实施效果、教学体会等方面阐述RNA提取、定量及RT-PCR综合性实验在分子生物学检验技术教学中的实施,并分析教学中存在的问题,提出相应的解决对策,为有关院校开设相关综合性实验教学提供参考。

摘要：本文从实验设计思路、实验实施、实验效果、实验体会等方面对"重组质粒的转化、提取及酶切分析"综合性实验在医学检验专业分子诊断学教学中的实施进行阐述,并针对实验教学中存在的问题,提出了具体的解决措施。