摘要：目的筛选并鉴定可用于实验室快速检测副溶血性弧菌的适配体序列。方法利用全菌SELEX技术,通过人工合成全长86 bp、中间含40 bp随机核苷酸序列的单链DNA文库,筛选与副溶血性弧菌高效结合的适配体,对候选适配体序列进行特异性分析,并评估其二级结构和Kd值。结果第4轮筛选即出现比较明显的产物富集,继续筛选至第12轮结束。经克隆和测序后得到5条候选适配体序列(F2、F5、F6、F19、F30),它们与副溶血性弧菌的结合率分别为68.8%,68.8%,73.1%,65.2%和72.7%;特异性实验显示,5条候选适配体均能与副溶血性弧菌高效结合,与5种其它常见致病菌则结合不明显;用DNA folding form对5条候选核酸适配体序列进行二级结构模拟,结果显示,其二级结构以茎环(凸环和圆环)为主,茎环结构中的茎多由G-C配对组成;采用荧光分析法对5条候选适配体的Kd值进行分析测定,其对靶细菌的解离常数分别为15.88、15.24、9.13、4.12和25.39 nM。结论全菌SELEX技术可用于副溶血性弧菌适配体筛选,5条候选适配体与靶细菌结合力强,特异性高。

摘要：目的:建立双重实时荧光RT-PCR方法(DqRT-PCR)以检测甲、乙型流感病毒。方法:设计甲、乙型流感病毒M基因的特异性引物及双标记探针,优化反应条件,建立双重实时荧光RT-PCR方法(DqRT-PCR)。设计甲型流感病毒HA1、HA3亚型的H1、H3、N1、N2基因的特异性引物,建立双重普通RT-PCR(DRT-PCR)方法。对HA1、HA3和B型细胞分离株进行DqRT-PCR和DRT-PCR检测。对80份发热病人咽拭子标本进行DqRT-PCR和DRT-PCR检测及细胞培养分离病毒。结果:DqRT-PCR检测甲型和乙型靶DNA片段(重组质粒)最低极限为1×103拷贝。DqRT-PCR和DRT-PCR对11株H1N1、16株H3N2和12株乙型细胞分离株检测,符合率100%。DqRT-PCR、DRT-PCR和细胞培养分离病毒对80份咽拭子标本的阳性率分别为:37.5%(30/80)、30.0%(24/80)和43.8%(35/80),检出率差异未见统计学意义(2χ=5.5,P>0.05)。与细胞培养分离病毒法比较,DqRT-PCR的阳性和阴性总符合率为73.7%(59/80),阳性预测值为62.9%(22/35),阴性预测值为88.9%(40/45);经配对2χ检验,差异无统计学意义(2χ=0.76,P>0.05)。结论:建立DqRT-PCR可应用于甲型和乙型流感的检测,以多种检测方法互补将有助于提高临床标本的病毒检出率。

摘要：目的:为检测短乳杆菌gyrB基因序列。方法:设计两对简并引物对3种啤酒污染乳酸杆菌进行PCR扩增,获得短乳杆菌部分目的基因片断。并将该片断克隆至pGEM-T Easy载体,经限制性内切酶分析和测序获得短乳杆菌gyrB基因部分序列。结果:通过对序列进行进化树分析,发现该序列与啤酒典型污染菌植物乳酸杆菌gyrB序列相似性较高。结论:短乳杆菌gyrB序列对于建立啤酒中短乳杆菌快速检测具有十分重要的意义。

摘要：设计思路:小班化班级人数少,材料相对丰富,操作空间也相对充分,所以比较适合安排烹饪一类的操作活动。一方面,孩子可以自主地、积极地投入到感兴趣的活动之中,提高操作效率;另一方面,教师可放开手脚,鼓励幼儿大胆探索。