摘要：高校实验室是培养创新型人才的重要实践基地,伴随“互联网+教育”改革的不断深入,实验室的建设正在朝着规范化、智能化、信息化、开放化的方向发展,传统的实验室管理模式已经不能满足需求。文章立足于贵州医科大学基础医学实验室管理现代化需求,在分析国内外实验室建设与管理的基础上,通过深入走访调研,了解实际痛点问题,设计开发基础医学实验室数字化管理系统。首先,结合业务描述,采用UML建模技术进行分析,确定系统总体设计及各模块设计,使用ER图对数据库进行了详细设计;其次,系统采用B/S架构,以MySQL8作为数据库,Apache Tomcat作为服务器,HTML语言结合Javascript+Vue+CSS客户端技术,以Java为开发工具,进行了设计与开发;最后,对系统投入教学使用情况进行总结并对下一步工作进行了展望。该系统以用户中心、实验设备管理、实验耗材管理、实验课程管理和数据决策管理为核心功能模块,基本满足了学校基础医学实验室管理及实验教学需求,对学校教学质量的提高和数字化建设具有积极推动作用。

摘要：克隆家蝇内源性β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BG)基因,建立两种原核表达体系和一种真核表达体系,分别检测表达产物的活性,比较不同表达体系对其表达水平及重组蛋白酶学性质的影响,为进一步研究和利用家蝇BG酶奠定基础。本研究根据BG酶基因的cDNA序列设计引物扩增BG酶基因成熟肽的基因片段,分别采用表达载体pET-28a(+)和pEGX-4T-1构建原核表达体系并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。在65 kDa附近均出现特异性蛋白条带,进行Western Blotting鉴定证实重组质粒在其宿主菌*** BL21(DE3)中成功表达,命名为MDBG-1蛋白和MDBG-2蛋白。同时选用真核表达载体pPICZa A构建酵母分泌型表达体系在酵母细胞GS115中获得稳定的表达,将其命名为MDBG-3蛋白。采用七叶苷平板法和DNS法对三种表达体系所重组表达的蛋白进行酶活性鉴定和检测,显示3种表达体系所表达的融合蛋白均具有BG酶活性,其酶活力有所不同,且真核表达体系所表达的蛋白酶活性最高。本研究对家蝇β-葡萄糖苷酶基因表达的重组蛋白特性进行初步研究,为发现新的有效纤维素酶体系提供基础数据。

摘要：对家蝇PGRP-SA基因进行克隆表达以及研究其重组蛋白与细菌结合能力。从构建的家蝇(Musca domestica)幼虫cDNA质粒文库中筛选到PGRP-SA基因,以cDNA质粒为模板设计引物,通过PCR扩增,获得PGRP-SA基因完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析。构建pET-28a(+)-PGRP-SA重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达及蛋白纯化。利用半定量RT-PCR检测PGRP-SA在家蝇3龄幼虫不同组织中的表达量差异。PGRP-SA重组蛋白进行微生物结合实验。结果表明,PGRP-SA基因ORF全长615 bp,编码204个氨基酸,理论分子量22.8 k D,等电点9.11,具有保守的PGRP结构域。成功构建了pET-28a(+)-PGRP-SA重组质粒,蛋白经IPTG诱导后在大肠杆菌中获得表达,经亲和层析柱纯化获得目的蛋白,利用Western blot检测证明纯化蛋白与预期大小相符。PGRP-SA在家蝇3龄幼虫血淋巴、脂肪体、前肠、中肠、气管、马氏管都有表达,血淋巴组织中表达量最高,后肠无表达,由此说明PGRP-SA基因的表达具有一定的组织性。PGRP-SA重组蛋白能与金黄色葡萄球菌和大肠杆菌结合,与白色念珠菌不能结合。成功表达及纯化家蝇PGRP-SA蛋白,证实家蝇PGRP-SA能与金黄色葡萄球菌和大肠杆菌结合。

摘要：【目的】旨在探索兴义维蚋Simulium xingyiense实验室饲养方法,使其能在实验室内连续饲养2代。【方法】设计制作羽化杯、交配管、喂血装置和产卵管,并改造市售小型鱼缸供蚋卵孵化及后续饲养。第1代饲养:将野外采集得到的兴义维蚋蛹置于羽化杯中饲养获得成虫;在交配管中诱导成虫交配(30 min);将雌蚋转移至喂血装置中喂养(90 min);将饱腹雌蚋置于产卵管中产卵;将产出的卵置于改造过的小型鱼缸中孵化,并饲养至幼虫化蛹。第2代饲养:除蛹来源于第1代饲养外,所有步骤同第1代饲养。全部实验在温度20℃、相对湿度70%下进行,但在喂血环节分别测试喂血培养基不同温度和成分对饱腹率和产卵率的影响。【结果】添加ATP的血清培养基更能吸引雌蚋吸血;在喂血培养基温度为34℃时雌蚋饱腹率最高;兴义维蚋雌虫喜食牛血清培养基;喂血培养基内血清含量越高,饱腹雌蚋产卵率越高;在最适喂养条件下雌蚋饱腹率为25.3%,产卵率为29.4%,平均每只雌蚋产163.5个卵,蚋卵孵化率为85.5%。幼虫生长周期为13-15 d,结蛹率为10.7%;蛹经4-6 d可羽化为成虫,羽化率为95.2%。【结论】兴义维蚋可在实验室内连续饲养2代,能够满足后续分子生物学实验要求,但幼虫结蛹率较低,提示改善幼虫饲养、提高结蛹率可能是最终建立兴义维蚋实验室品系的关键所在。

摘要：目的探讨家蝇溶菌酶(MDLZM)基因及编码的蛋白质结构和特征。方法利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具,结合其他生物信息学分析软件包,从Gen Bank上家蝇基因组序列识别出编码MDLZM的基因,分析预测该蛋白质的结构功能;设计引物PCR扩增MDLZM基因,将其克隆到原核表达质粒PEASY-E1中,重组质粒在大肠杆菌中的表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。结果 MDLZM基因序列最大开放阅读框(ORF)为435 bp,编码145个氨基酸,理论分子量为15 958.4 Da,等电点为8.65;构建的重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定确为MDLZM基因;SDS-PAGE分析结果显示,重组质粒可在大肠杆菌Origmi B/DE3中表达,表达产物纯化后得到的融合蛋白相对分子质量约为15958.4 Da,诱导18 h蛋白表达量最高,SDS-PAGE鉴定得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。结论成功构建PEASY-E1-MDLZM重组原核表达质粒并表达出融合MDLZM蛋白。

摘要：采用EST测序技术从构建的家蝇(Musca domestica)幼虫c DNA质粒文库中筛选到胸腺肽(Thymosin,THY)基因,以该基因的c DNA文库质粒为模板,设计引物,通过PCR扩增,测序鉴定,获得THY基因完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽和亚细胞定位等方面进行预测和分析。构建p ET-28a(+)-THY重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。研究结果表明,THY基因ORF全长384 bp,编码127个氨基酸,理论分子量14.3 k D,等电点为5.22,具有THY家族的蛋白保守结构域。构建重组原核质粒p ET-28a(+)-THY,经IPTG诱导,蛋白在大肠杆菌中获得表达,经亲和层析柱纯化获得目的蛋白,Western blot检测发现纯化的目的蛋白大小正确。

摘要：目的对家蝇热休克蛋白20(HSP20)基因进行生物信息学分析,并进行克隆、表达研究。方法利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具,结合其他生物信息学分析软件包,从Gen Bank上家蝇基因组序列识别出编码HSP20的基因,分析预测该蛋白质的结构功能;设计引物PCR扩增HSP20基因,将其克隆到原核表达质粒PEASY-E1中,重组质粒在大肠杆菌Origmi B/DE3中经用异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)鉴定。结果 HSP20基因序列全长865bp,最大开放阅读框(ORF)为567bp,编码188个氨基酸,理论分子量为21443.2 Da,等电点为5.96;所构建的重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定成功;SDS-PAGE分析结果显示,重组质粒在Origmi B/DE3中表达并纯化,得到的融合蛋白相对分子质量约为21443.2 Da,诱导12 h蛋白表达量最高,SDS-PAGE法得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。结论成功构建PEASY-E1-HSP20重组原核表达质粒并表达出融合HSP20蛋白,为进一步研究该蛋白的功能奠定基础。

摘要：对家蝇溶菌酶(Musca domestica lysozyme,MDLZM2)基因进行克隆、序列分析,构建原核表达载体并在大肠杆菌中表达。从Gen Bank家蝇基因组中筛选获得MDLZM2基因。以该基因的序列设计引物,进行PCR扩增,测序分析获得该基因完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽、二级结构、三级结构和保守结构域等方面进行预测和分析。构建p EASY-E1-MDLZM2重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S Chemically Competent Cell中进行诱导表达及纯化。结果表明MDLZM2基因ORF全长552 bp,编码183个氨基酸,理论分子量21.2 k Da;等电点为6.13,具有Lysozyme家族的蛋白保守结构域。成功构建重组原核表达p EASY-E1-MDLZM2并诱导表达、纯化重组蛋白,为进一步研究该蛋白的生物学及免疫学活性奠定了基础。

摘要：通过正交试验及单因素试验对五条蚋S. quinquestriatum ISSR-PCR反应体系中的引物、DNA模板、dNTP、Mg2+、BSA、TaqDNA聚合酶浓度6个关键因素进行优化,建立五条蚋ISSR最适反应体系:20μl反应体系中引物1.0μmol/L、DNA模板50.0ng/μl、dNTP0.15mmol/L、Mg2+1.50mmol/L、BSA2.00mg/ml、TaqDNA聚合酶0.155U/μl。通过对24条备选引物进行温度梯度筛选,获得8条能够稳定扩增且多态性较好的引物。为今后利用ISSR技术进行五条蚋种群遗传多样性研究奠定了良好的技术基础。

摘要：【目的】探明家蝇β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BG)在家蝇体内的功能,为深入研究家蝇BG在木质纤维素降解中的作用奠定基础。【方法】针对家蝇BG基因的功能结构域设计3对特异性引物用于dsRNA的体外合成,通过显微注射的方法将dsRNA导入家蝇2龄幼虫,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测抑制效率,分别以滤纸、水杨苷、微晶纤维素及羧甲基纤维素钠为底物检测BG基因的干扰对家蝇消化道粗酶液滤纸酶活性、BG、CBH(Cellobiohydrolase)及EG(Endoglucanase)酶活性的影响。【结果】在注射dsRNA后18 h家蝇幼虫消化道中BG基因的表达量下降62%且此时为最佳干扰时间点,在BG基因表达受到抑制后家蝇消化道的滤纸酶、BG酶活性显著降低,且时间变化趋势与上述干扰条件下BG基因表达量变化一致,均在干扰后18 h酶活性达最低,但CBH及EG酶活性较对照组无显著变化。【结论】RNA干扰技术能够有效抑制家蝇BG基因的表达,推测家蝇BG具有滤纸酶和BG酶活性。