摘要：还原型谷胱甘肽(GSH)的巯基和两个羧基分别与2,4-二硝基氯苯(DNCB)和甲醇反应,合成出半抗原Hp2;通过戊二醛将Hp2连到牛血清白蛋白(BSA)上,合成出全抗原Ag2;吸收光谱法测出Hp2在BSA上的平均连接量为30.2mol/mol.用标准的单克隆抗体(McAb)制备技术,制备出阳性McAb(IgG)-4G3;4G3对GSH和半抗原Hp2的解离常数(K_D)表明,单克隆抗体4G3对GSH具有较强的亲和力.对4G3进行两步化学诱变(Chemical Mutation),诱变后即为具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性的含硒抗体酶(m4G3),m4G3的GPX活力为9337U/μmol,是兔肝GPX(RL-GPX,5780U/μmol)的 1.6倍,曾报道的含硒抗体酶m4A4(1239 U/μmol)的7.5倍,制备出活性高于天然酶的抗体酶,证实了半抗原设计思想.将m4G3拆分成Fab和Fc片段,发现m4G3的活性中心位于Fab片段上,m4G3的硒代半胱氨酸(Se-Cys)含量为1.9 mol/mol.

摘要：提出一种新的抗体酶设计思想———疏水腔修饰法 ,并根据这一思想合成出谷胱甘肽 (GSH)的类似物S 二硝基苯取代的谷胱甘肽二丁酯 (GSH S DNPButyles ter)作为半抗原Hapten 3;将该半抗原连到载体蛋白上进行免疫 ,利用单克隆抗体制备技术得到抗体 1C8,通过 2步化学修饰方法 ,将谷胱甘肽过氧化物酶的催化基团硒代半胱氨酸 (Sec)引入到抗体 1C8可变区中 ,得到转换值即催化中心活力 (kcat)为天然兔肝谷胱甘肽过氧化物酶 1 7倍的抗体酶Se 1C8,是曾经报道抗体酶Se 4A4,Se 4G3的 40倍和 5 3倍 ,是目前与天然酶相比催化效率最高的抗体酶 。