摘要：针对猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2、猪伪狂犬病病毒(PRV)gD和猪细小病毒(PPV)VP2基因保守区域,设计了特异性引物,在分别建立单一病毒基因PCR检测方法的基础上,通过对3组引物的比例和浓度、dNTPs和Mg2+浓度、退火温度等条件的优化,建立了针对上述3种病毒的三重PCR检测方法。敏感性试验表明,应用该方法最低可检测到4×10-4ng/μL的PRV双链DNA模板和2×10-5ng/μL的PCV2和PPV单链DNA模板。对21份自然感染病猪样品的检测结果表明,该三重PCR检测结果与单一PCR检测的结果完全符合。试验结果显示,建立的三重PCR方法可用于3种DNA病毒的同时检测,具有快速、准确的特点,有临床应用前景。

摘要：根据GenBark中登录的猪圆环病毒2型基因序列,应用PrimerPremier5.0设计筛选一对扩增ORF2基因引物,建立从猪病料中直接检测PCV2感染的PCR方法。扩增PCV2阳性样品出现一条447bp的特异性DNA条带,扩增产物测序结果证实为PCV2ORF2基因序列。应用本方法扩增猪瘟病毒(HCV)、猪繁殖与障碍综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)等常见猪病原均未出现特异性条带,表明方法特异;敏感性试验结果表明,样品DNA模板检测浓度可达到9.8×10-4ng/μL;重复性和稳定性试验结果表明,用本试验建立的PCR方法进行PCV2检测,结果稳定可靠。经病猪临床检测应用,在66份病猪样本中,PCV2感染阳性率为27.27%,且多与PRRSV、PRV、HCV、PPV等一种或多种病毒混合感染,混合感染比例达72.22%。

摘要：根据猪嵴病毒3D基因保守序列设计引物和TaqMan探计．通过优化反应体系．建立了猪嵴病毒荧光定量RT—PCR检测方法，并对该方法进行特异性、敏感性和重复性评价；同时以10倍梯度稀释的质粒标准品建立荧光定量RT—PCR的标准曲线，构建定量分析模型。结果显示．建立的方法能特异性检测猪嵴病毒，与其他引起猪腹泻的病毒无交叉反应，对标准品的检测灵敏度达10copies／pL；标准曲线CI值和模板终浓度在107～10copies／μL范围内有良好的线性关系；重复性试验变异系数均小于2．5％。对139份猪粪便样品进行检测，荧光定量RT-PCR阳性检出率为30．94％（43／139），常规RT—PCR为29．50％（41／139）。本研究建立的荧光定量RT-PCR可用于猪嵴病毒的快速检测和流行病学调查。

摘要：针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N基因保守序列设计引物与TaqMan探针,在建立常规PCR的基础上,设计并优化了TaqMan荧光定量PCR方法用于PRRSV核酸的检测。应用新建立的荧光定量PCR方法检测其它主要猪病病原,无任何非特异性反应;针对PRRSV阳性克隆质粒的检测灵敏度可以达到1.2×101copy/ml,比常规PCR高100倍;通过对48份临床疑似样本的检测表明有29份样本为PRRSV阳性,与巢式PCR检测结果一致,而常规PCR只能检出其中19份阳性样本,灵敏度优于常规PCR方法。结果表明,试验建立的PRRSV TaqMan荧光定量PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可为PRRSV临床诊断提供一个更为有效的方法。

摘要：根据伪狂犬病病毒gD、gE基因序列设计2对引物及其对应的探针,通过对引物、探针浓度的优化,建立了猪伪狂犬病病毒野毒和减毒活疫苗株荧光定量PCR检测鉴别方法,并评价其特异性、敏感性和重复性。结果显示,猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪流行性乙型脑炎病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪博卡病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒均无扩增曲线。野毒株均出现gD和gE基因扩增曲线,而疫苗株只出现了gD基因扩增曲线,表明该检测方法具有良好的特异性。建立的gD和gE基因标准曲线Ct值和模板终浓度在1×10^8~1×10 copies/μL范围内均具有良好的线性关系,灵敏度均可达1×10 copies/μL。对39份猪组织样品进行检测,荧光定量PCR检出5份样品猪伪狂犬病病毒gD、gE阳性,表明这5份猪组织样品为猪伪狂犬病病毒野毒感染。常规PCR检出5份猪伪狂犬病病毒阳性,经测序为野毒感染,2种方法符合率为100%。本研究建立的荧光定量PCR可用于猪伪狂犬病病毒的快速检测和流行病学调查。

摘要：根据NCB I中登录的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列,应用Prim er Prem ier 5.0软件设计一对引物,经反应条件优化,建立PPV的PCR检测方法。经特异性和敏感性测定,其最低检测值可达6×10-3ng/μl。采用PCR方法对118份临床样品进行应用检测,结果检测到6份为阳性样品。

摘要：P3实验室通风管道中文丘里阀由于其结构设计中存在泄漏风险,在文丘里阀外周安装密闭箱可消除这一风险,但仍需对该密闭箱是否存在泄漏风险以及箱体内部消毒效果进行评价。本文专门介绍了文丘里密闭箱PAO检漏及其箱体内部H2O2消毒后的消毒效果评价方法。

摘要：根据NCBI中登录的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列,应用Primer Premier 5.0软件设计一对引物,经反应条件优化,建立PPV的PCR检测方法。结果:(1)反应条件优化退火温度分别为44℃～70℃,每2℃递增。