摘要：采用PBL教学法进行病例讨论式教学方式,已经在高等医学教育中得到广泛应用。PBL病例讨论课普遍存在部分学生参与度不高的现象。为了解决这个问题,在PBL病例讨论课中进行分小组讨论式的教学设计改革,将10人组拆分成3组或4组,每组2~~3人;调整教学评价模式,将原来的指导教师综合评价转变为组对组之间学生评价并设置加分项。教学组织形式和评价模式改革有助于所有学生积极参与讨论,取得了较好的课堂教学效果。

摘要：从医学遗传学实验课的重要性、授课方式、授课手段以及实验评分方式等方面，阐述了强化医学遗传学实验课改革的几点体会，力求在加强学生独立实验能力、增强学生实验设计以及创新能力方面发挥作用。

摘要：利用Gateway克隆技术构建重组抗瘤肽AIK的原核表达体系,建立表达及纯化重组AIK的最优条件,为深入研究和利用AIK奠定基础。首先,设计含AttB重组位点的引物,通过重叠PCR技术扩增出Att B-TEV-FLAG-AIK序列,利用BP重组反应将目的序列TEV-FLAG-AIK克隆到供体载体pDONR223中,构建入门载体,再通过LR重组反应,将目的序列转移到目的载体pDEST15中,构建GST-AIK融合蛋白原核表达质粒。随后,在BL21(DE3)工程菌中优化诱导融合蛋白表达的条件。以谷胱甘肽磁珠纯化GST-AIK融合蛋白,再以rTEV酶切除GST,获得FLAG-AIK重组蛋白。最后以MTS法检测FLAG-AIK对白血病细胞HL-60的细胞毒性。菌液PCR验证和测序分析表明成功构建了重组抗瘤肽AIK的入门质粒和原核表达质粒。在BL21(DE3)工程菌中实现了GST-AIK融合蛋白的高效可溶性表达。并测得在37℃下以0.1 mmol/L IPTG诱导工程菌(OD600=1.0)4 h,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的30%以上。经GST亲和层析、rTEV酶切除GST标签及二次GST亲和层析获得纯度高于95%的FLAG-AIK蛋白。MTS法测得所制备的FLAG-AIK蛋白抑瘤活性与化学合成的AIK相当。总之,本课题应用Gateway克隆系统成功构建了抗瘤肽AIK的原核表达质粒,实现了GST-AIK融合蛋白的高效可溶性表达,经亲和层析获得了有生物活性的重组AIK多肽,为后续深入研究和大规模制备奠定了基础。

摘要：目的探讨survivin表达抑制与晚期宫颈癌放疗敏感性的关系。方法设计并构建靶向survivin的shRNA真核表达载体(psh-svv),转染宫颈癌Hela细胞,用实时PCR法检测RNA干扰(RNA interference,RNAi)后survivin mRNA的表达,用Western blot检测survivin蛋白表达,观察survivin基因沉默后放射线对Hela细胞生长活性的作用,转染psh-svv对Hela细胞凋亡的影响,裸鼠移植瘤生长速度及对放射线敏感性的变化。结果测序结果证实载体构建成功。转染psh-svv的实验组survivin mRNA表达明显低于3个对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组survivin蛋白表达亦明显低于3个对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。放疗后72h实验组细胞生长抑制率明显高于3个对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组caspase-3活性显著高于其他3组(P<0.05)。survivin基因沉默后,裸鼠移植瘤生长速度减慢,survivin低表达的实验组小鼠对放射线敏感。结论 psh-svv通过RNAi有效降低宫颈癌Hela细胞survivin的表达,抑制Hela细胞增殖,诱导凋亡,增加Hela细胞对放射线的敏感性。

摘要：从ＰＣＲ扩增产物中制备单链ｃＤＮＡ［英］／ＭｉｃｈａｅｌＮ…／／ＴＩＧ．－１９９３，９（１１）．－３７６～３７７单一ＣＤＮＡ主要由靶ＤＮＡ和与过量的相同序列ｍＲＮＡ杂交的ＤＮＡ上常见可移动序列构成。现已设计出许多消减克隆的方案，然而，这些方法的应用前...