摘要：为了建立牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的快速诊断方法,本试验依据LSDV GCPR基因的保守序列区域设计了荧光定量PCR的引物和探针,并建立了快速诊断LSDV的荧光定量PCR方法。结果表明,建立的LSDV荧光定量PCR方法在3.67×10^(1)~3.67×10^(7) copies/μL拷贝标准品间具有良好的线性关系,线性相关系数达0.9905;该方法具有良好的敏感性,其检测病毒系列含量下限为3.67×10 copies/μL;该方法特异性良好,与山羊痘病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒等病毒不存在交叉反应;该方法重复性较好,批内和批间的变异系数均介于0.133%~1.81%。该方法,临床样品的检测符合率达90%。本试验所建立的LSDV荧光定量PCR方法为临床诊断牛结节性皮肤病提供了一种快速、灵敏的检测方法,为LSDV流行病学调查和监测提供了技术支持。

摘要：猪瘟是严重危害养猪业的一种烈性传染病,病死率高,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物疫病。E2蛋白是猪瘟病毒中最主要的保护性抗原,因此,围绕E2的基因工程疫苗研究已成为热点。本研究以含有猪瘟E2基因的重组质粒pMD18-T-E2为模板,设计一对特异性引物扩增去除跨膜区的E2基因,将PCR产物插入巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZαA中,构建重组质粒pPICZαA-E2,将该质粒用SacⅠ酶切线性化后,电穿孔导入巴斯德毕赤酵母X-33中,经Zeocin筛选得到高拷贝转化子,通过甲醇诱导表达、SDS-PAGE和Western bolt试验验证,结果表明E2蛋白在酵母中获得成功表达。

摘要：目的构建ARQ基因型PrP前体蛋白基因原核表达重组质粒,为TSE的检测及诊断、PrP的结构与功能研究奠定基础。方法根据GenBank中绵羊PrP基因全序列和表达载体pET28a载体的多克隆位点设计了绵羊PrP前体蛋白基因引物,以绵羊基因组DNA为模板,PCR扩增绵羊PrP前体蛋白基因,通过酶切将些基因克隆到pET28a(+)载体中,构建了重组原核表达质粒pET-OPrP。重组质粒转化***-21感受态细胞,用IPTG诱导表达,通过PAGE电泳和Western-blo-ting鉴定表达的重组蛋白。结果在pET28a(+)载体中成功克隆了PrP前体蛋白基因,并在***中成功表达了重组的PrP前体蛋白。结论绵羊PrP前体蛋白基因可以在***中表达。本次克隆得到的小尾寒羊的PrP基因型为ARQ。

摘要：参考GenBank上发表的H5亚型禽流感(AIV)血凝素(HA)基因序列及鸡白细胞介素18成熟蛋白(mChIL-18)的cDNA基因序列,分别设计了HA1和mChIL-18基因的2对引物。然后分别以pMD18-T-HA质粒和pGEX-mChIL-18质粒为模板,扩增出了H5亚型AIV的HA1基因和mChIL-18的cDNA片段。再以杆状病毒pFast-BacTMdual为载体,将H5亚型AIV HA中的HA1基因和mChIL-18基因分别插入到双表达载体pFastBacTMdu-al的p10启动子(PP10)和多角体蛋白启动子(PPH)的下游,构建携带HA1基因和mChIL-18基因的重组pFastBacTMdual-HA1-mChIL-18真核表达质粒。最后将构建的真核表达质粒转座入大肠杆菌DH10Bac,并利用昆虫细胞进行转染。这个重组载体的构建为考察mChIL-18作为免疫增强剂的作用及下一步AIV疫苗的研究奠定了坚实的基础。

摘要：对于全面掌握禽间H7N9流感感染状况来说,开展紧急流行病学调查时发现病毒的抽样方案设计相当重要。制定方案的步骤包括:明确抽样方案设计目的、确定研究方法和抽样原则、设计抽样方案(计算群体抽样数量、场群的随机选择、场内抽样数量的计算等)、方案实施、数据收集整理和分析等。在方案制定过程中充分体会到了兽医流行病学技术的重要性。

摘要：本文介绍了山东省近年来动物疫情信息大数据建设的实施情况:2019年,山东省大数据局启动了“山东省智慧畜牧业务支撑平台”项目,山东省动物疫情信息大数据建设是自2019年开展的山东省动物疫病监测预警平台建设中重要的组成部分。实施过程设计为3个部分,依次为数据采集与录入部分、数据上报和审核部分、数据汇总与分析部分。2020年上半年,动物疫情信息大数据建设工作首先在山东省威海市试运行开展。2020年6月农业农村部下发加强关于非洲猪瘟等动物疫病的监测和疫情上报工作等内容文件,对养殖场自检情况、屠宰场自检情况以及无害化处理场检测情况收集的数据更加细化,据此,山东省及时对之前设计的报告工作信息化方案进行了调整,并运用到了工作实践当中。目前,山东省动物疫情信息大数据建设工作还处于区域试点摸索阶段,对于架构中的问题,也还在不断地调整和完善。

摘要：根据已知的绵羊PRNP基因序列设计引物,扩增出完整的PrP前体蛋白基因,将获得的基因克隆到pGEM-T载体中,得到插入PrP前体蛋白基因的pGEM-T-OPrP质粒,经PCR、酶切、测序鉴定后,用EcoRI和NotI从pGEM-T-OPrP上切下目的片段后,连接到汉逊酵母表达载体pFMDHZ-α-A中,通过PCR、酶切、插入鉴定保证正确插入后,经电转化将重组质粒pFMDHZ-α-A-OPrP转入多形汉逊酵母中,随后通过甲醇诱导进行表达。本研究表达的绵羊PrP前体蛋白,为绵羊痒的检测及诊断、PrP的结构与功能研究奠定基础。

摘要：《国家布鲁氏菌病防治计划(2016—2020年)》要求,到2017年6月,各省(自治区、直辖市)畜牧兽医部门以县(市、区)为单位组织完成布鲁氏菌病基线调查。对于牛,通常以普查方式完成基线调查;而对于羊,则需要应用兽医流行病学技术,进行基线调查方案设计。只有严格按方案开展调查,才能获得较为可靠的基线数据。本文详细介绍了羊布鲁氏菌病基线调查方案设计的主要过程:确定抽样框,计算该县需要抽取的场户数,计算每个乡镇的抽样场户数,每个乡镇抽样场户的随机选择,场户内羊只抽样数量的计算,以及场户内抽样羊只的选择,可为县级羊布鲁氏菌病基线调查提供方向。

摘要：参考GenBank上发表的H5亚型禽流感(AIV)血凝素(HA)基因序列及鸡白细胞介素18成熟蛋白(mChIL-18)的cDNA基因序列,分别设计了HA1和mChIL-18的cDNA的2对引物。然后以pMD18-T-HA质粒和pGEX-mChIL-18质粒为模板,扩增出了H5亚型AIV的HA1基因和mChIL-18的cDNA片段。再以杆状病毒pFastBacTM dual为载体,将H5亚型AIV HA中的HA1基因和mChIL-18基因分别插入到双表达载体pFastBacTM dual的p10启动子(PP10)和多角体蛋白启动子(PPH)的下游,构建携带HA1基因和mChIL-18基因的重组pFastBacTM dualH-A1-mChIL-18真核表达质粒。最后将构建的真核表达质粒转座入大肠杆菌DH10Bac,为下一步进行昆虫细胞的转染奠定了基础。这个重组载体的构建为考察mChIL-18作为免疫增强剂的作用及下一步AIV疫苗的研究奠定了坚实的基础。

摘要：本文参照有关国际组织规则和发达国家实践经验,基于传染源、传播途径和易感动物三个环节,分析了健全我国重大动物疫病长效防控机制的若干趋向。包括:要实行改良扑杀政策、扑杀动物的市价评估补偿制度,并健全病死动物无害化处理厂运营机制,从而提高传染源控制能力;优化屠宰厂布局、完善动物疫病区域化管理制度、健全活动物市场准入制度,推动建立动物电子交易市场,为切断疫病传播途径创造有利条件;通过加大对养殖者的干预力度,推进生物安全隔离区建设,完善疫苗免疫措施等,多举措提高易感动物保护水平。同时,还要继续推进兽医管理体制改革,为动物疫病防控提供坚强的人员、财政和法律保障。