摘要：目的比较流式细胞术(FCM)与活体成像法、qPCR法识别外周血CAR^(+)细胞的结果,验证其结果的可靠性和灵敏性。方法分别给予免疫缺陷型荷瘤(Raji-Luc细胞造模)小鼠溶媒、CAR-T1或CAR-T2细胞。在不同时间点测定动物体内Raji-Luc细胞的荧光强度,FCM法测定人源T淋巴细胞和CAR-T细胞中的CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+)个数,并使用qPCR法检测外周血中每纳克基因组DNA中CAR-T1和CAR-T2拷贝数。结果CAR-T1组动物体内T细胞及CAR-T细胞数量在给予细胞后第5~7周大幅增加。CAR-T2组动物体内T细胞及CAR-T细胞数量在给予细胞后第10~14天大幅增加,之后大幅降低,给予细胞后第4周降至基线且未见再次扩增。CAR-T细胞的流式检测结果与活体成像结果基本相符,且与qPCR法检测外周血中CAR-T细胞的分布趋势基本一致。此外,EDTA-K2抗凝剂对FITC标记的抗CD8^(+)抗体有较明显的影响,导致标记为CD3^(+)CD8^(+)的细胞群左移且检测结果为零。结论对不同增殖特性的CAR-T细胞,流式检测结果与其体内肿瘤杀伤情况相关,且比qPCR法更为准确和灵敏,为CAR-T细胞的非临床安全性评价试验设计提供有益借鉴。

摘要：为了提升微通道板型光电倍增管(MCP-PMT)能量分辨率,研究不同分压比对能量分辨率的影响,通过分析光电子从入射到倍增的过程,研究影响MCP-PMT能量分辨率的因素。通过调节光电倍增管(PMT)聚焦极电压、两片通道板分压以及通道板间隙电压解决了增益动态范围小、能量分辨率差的问题。实验结果表明,减小聚焦极电压可提高分辨率但收集效率会降低,提高MCP2电压后分辨率略有降低同时动态范围大幅提高,通道板间加反向电压可显著提升能量分辨率。根据实验结果,设计了一种MCP1与MCP2分压比1:1.6、通道板间隙加-35 V反向电压的分压器,将其应用于50只样管,并对样管进行测试,其平均能量分辨率从44减小到33,有效地改善了微通道板型光电倍增管的能量分辨率。

摘要：利用华占、五山丝苗、中早35和五丰B等4个品种背景的多个OsNramp5基因敲除株系及其原始品种(对照)作为供试材料,在3个不同环境采用随机区组设计进行了小区产量的比较试验。试验结果表明:虽然OsNramp5基因敲除材料显示出了优越的降镉特性,但在不同环境中几乎全部表现为不同程度的减产(减幅2.9%~25.6%),在不同OsNramp5基因敲除株系与野生型对照的42次产量比较事件中,减产幅度超过4%并且统计上显著的占比为57.1%,减产幅度超过5%但统计上不显著的占比为28.6%,减幅4%以下但不显著的占比为11.9%,略微增产(仅1例,增幅2.6%)但不显著的占比为2.4%;相同OsNramp5基因敲除材料在不同环境减产幅度不同,多数OsNramp5基因敲除株系的产量变异度比原始品种大,且不同品种背景基因敲除材料在不同环境下的减产幅度波动情况也存在差异,此外,相同品种背景的不同OsNramp5基因敲除株系(不同株系组培中发生的基因组背景突变存在差异)以及一个株系分离后代相同突变基因型不同姊妹系都存在产量显著差异的情况。OsNramp5基因敲除对水稻产量的影响受品种类型、组培突变和环境等因素的综合影响,多数OsNramp5基因敲除材料的稳产性能下降。因此,推荐选择合适品种进行OsNramp5基因敲除,获得基因敲除株系后精心选择优良株系或回交并进行多年多点试验再进行应用。