摘要：为探讨针对前C/C双靶区反义锁核酸(LNA)对转基因小鼠体内乙肝病毒复制的影响,本文采用完全随机设计分组,经尾静脉给药,实验组注射脂质体包裹的反义LNA片段,对照组分别注射5%葡萄糖液和空脂质体,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术、时间分辨免疫荧光技术、自动生化分析仪等分别检测血清乙肝病毒核酸、乙肝病毒表面抗原、清蛋白、谷丙转氨酶、尿素氮和肌酐等指标浓度;采用免疫组化法检测肝细胞内乙肝病毒核心抗原分布。结果表明,针对前C/C双靶区的反义LNA对乙肝病毒核酸复制、乙肝病毒表面抗原及核心抗原合成均有较强的抑制作用,且抑制效果明显高于单靶区。

摘要：目的探讨针对丙肝病毒5'非编码区内源性核糖体进入位点的锁核酸核酶(LNAzyme)对病毒基因复制与表达的特异性抑制作用。方法设计合成能切割HCV-5'-NCR-IRES位点的DNAzyme、硫代DNAzyme和LNAzyme。实验设对照组和实验组。对照组包括空白对照组、脂质体对照组和无关LNAzyme对照组。实验组包括DNAzyme、硫代DNAzyme组和LNAzyme组。以阳离子脂质体介导转染hep G2.9706细胞,用荧光定量PCR和化学发光技术分别监测24、48和96 h细胞培养上清液中HCV RNA含量及荧光素酶基因表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法监测细胞活性。结果加入核酶后,LNAzyme对HCV RNA复制和荧光素酶基因表达的抑制作用最强(P<0.05),平均抑制率分别为48.02%和53.05%,且随用药时间延长,抑制率呈增高趋势,96 h后,平均抑制率分别为81.21%和84.25%。LNAzyme对细胞活性无影响。结论 LNAzyme能特异性抑制丙型肝炎病毒5'非编码区的基因调控,且优于硫代修饰的DNAzyme。

摘要：目的:探讨针对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)C基因的锁核酸核酶对病毒RNA复制与表达的特异性抑制作用.方法:设计合成能切割HCV C基因位点的DNAzyme、硫代DNAzyme和LNAzyme.实验设对照组和实验组.对照组包括空白对照组、脂质体对照组和脂质体-无关LNAzyme对照组.实验组包括脂质体-DNAzyme、脂质体-硫代DNAzyme组和脂质体-LNAzyme组.以阳离子脂质体介导转染hepG2.9706细胞.采用荧光定量PCR和化学发光技术分别监测24、48、96 h细胞培养上清液中HCV RNA含量及荧光素酶基因表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法监测细胞代谢.结果:加入药物后,脱氧核酶、硫代脱氧核酶及锁核酸核酶组对HCV RNA复制和荧光素酶基因表达的抑制作用均较对照组强(P<0.01),其中,锁核酸核酶的抑制作用均较脱氧核酶及硫代脱氧核酶明显(P<0.05),平均抑制率分别达47.55%和52.44%,且随用药时间延长,抑制率呈增高趋势,96 h后,HCV RNA复制和荧光蛋白表达的下降率均较用药前明显(P<0.01),其中,锁核酸核酶的抑制作用均较脱氧核酶及硫代脱氧核酶明显(P<0.05),平均下降率分别达79.40%和80.05%.而LNAzyme对细胞活性基本无影响.结论:LNAzyme能特异性抑制HCV C基因的复制与表达,且优于硫代修饰的DNAzyme.