摘要：轻量化是实现工程机械"节能环保"的主要发展技术方向之一。设计了挖掘机工作装置轻量化试验,初步定量研究了工作装置轻量化对油耗的影响,为挖掘机开发阶段的整机油耗预估提供了参考数据。

摘要：“良好的开端是成功的一半。”一堂课如果导入设计得好，有个好开端，不仅可以使学生兴趣倍增，印象深刻，还可以使教师很快找到讲课的感觉，达到预期的课堂教学效果。如何设计才能使语文课导入既自然又吸引人呢？以下是教学实践中一些语文教师设计的导人方式，现将其加以整理，以供大家参考。

摘要：目的构建人前列腺癌细胞PFKFB4基因短发夹RNA(shRNA)干扰慢病毒载体,建立稳定干扰的人前列腺癌细胞株。方法通过GenBank检索人PFKFB4基因序列,根据shRNA引物设计原则,设计并合成PFKFB4-shRNA序列,并与携带绿色荧光蛋白序列的LV3载体连接,获得的重组质粒与慢病毒包装质粒系统共转染293T细胞,收集病毒。使用逐孔稀释滴度测定法对慢病毒滴度进行测定。将LV3-PFKFB4-shRNA慢病毒载体感染人前列腺癌细胞设置为空载的LV3 Negative Control组(LV3-NC组)、空白对照组(Blank组)和LV3-shPFKFB4组。采用RT-PCR检测人前列腺癌细胞PFKFB4 mRNA水平。结果重组质粒测序结果显示LV3-PFKFB4-shRNA慢病毒载体构建成功,通过荧光显微镜计数荧光细胞,结合稀释倍数计算病毒滴度为1×108TU/mL。RT-PCR结果显示,与LV3-NC组和Blank组相比,LV3-shPFKFB4组PFKFB4 mRNA水平显著降低(P<0.001),而LV3-NC组与Blank组PFKFB4-mRNA水平比较差异无统计学意义(P=0.271)。结论LV3-PFKFB4-shRNA慢病毒载体构成功,同时获得稳定感染的人前列腺癌细胞株。

摘要：目的构建PDK1基因短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,鉴定其对PC-3细胞PDK1基因的干扰效应。方法在GenBank数据库检索PDK1基因序列,参考该序列设计PDK1特异性过干扰序列,酶切过表达用载体LV3,纯化酶切产物后进行定向连接。将重组干扰病毒质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,测定病毒滴度。将构建的慢病毒感染PC-3细胞,采用real-time RT-PCR法鉴定其PDK1基因干扰效应。结果测序结果证实成功构建PDK1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,慢病毒滴度为1×108 TU/ml。real-time RT-PCR结果显示,LV3-PDK1-shRNA慢病毒感染PC-3细胞可显著抑制其PDK1 mRNA的表达(P<0.05)。结论成功构建PDK1基因RNAi慢病毒载体,获得稳定沉默PDK1基因的PC-3细胞株,为后续研究PDK1基因在前列腺癌细胞模型中的作用奠定基础。