摘要：根据GenBank上发表的羊附红细胞体16SrRNA基因序列(登录号AF338268)设计2对引物,用巢式PCR方法扩增16SrRNA的部分序列,将目的片段克隆并测序。测序结果与AF338268相似性达99%以上,只有3bp的差异。该方法与猪附红细胞体、羊肺炎支原体、链球菌、葡萄球菌和大肠杆菌均无交叉反应,能检测到的最低DNA量为25fg。用于检测的28份临床样本中,23份为阳性。所建立的巢式PCR检测方法具有较高的敏感性和特异性,可用于羊附红细胞体病急性感染和隐性感染的早期诊断,为该病的临床检测、流行病学调查、进出口检疫和实验室研究提供了新的技术手段。

摘要：目的为能够更加准确、敏感的检测出猪附红细胞体(Mycoplasma suis,***),本试验建立一种新的诊断方法—半巢式聚合酶链反应(hemi-nested Polymerase Chain Reaction,hemi-nested PCR)。方法利用Oligo 6.0和Primer 5.0软件设计筛选出合适的PCR引物,经酶切分析和半巢式PCR进一步鉴定后进行序列测定。同时与普通PCR诊断方法进行比较。结果测得的猪附红细胞体基因序列与GenBank中发表的猪附红细胞体基因序列(AJ504999)同源性为100%。特异性试验结果表明本实验设计的PCR引物不能从弓形虫、链球菌、大肠杆菌、猪肺炎支原体和猪伪狂犬病病毒的基因组DNA中扩增出条带。通过敏感性试验,半巢式PCR诊断方法最低能够检测出0.12fg的标准模板DNA。通过与普通PCR比较,证明本试验建立的半巢式PCR更具敏感性和实用性。结论本试验建立的半巢式PCR诊断方法具有特异、敏感、实用等特点,为猪附红细胞体的检测提供了一种可靠的诊断方法。

摘要：目的建立一种新型的猪附红细胞体病PCR诊断方法。方法根据猪附红细胞体部分CDS基因序列(AJ504999)设计引物,建立一种新的猪附红细胞体病PCR诊断方法。通过实验室染毒实验,建立感染猪附红细胞体病的小鼠模型,并应用研制的PCR方法进行实验室验证。应用建立的PCR诊断方法对辽宁5个城市的385个猪样本进行猪附红细胞体病流行病学情况调查,确定猪附红细胞体病的感染率。结果成功建立猪附红细胞体病PCR诊断方法,通过染毒模型验证了该方法具有快速、特异性强、敏感性高的特点。并估计出辽宁省猪群中附红细胞体总体感染率95%的可信区间为(82.50%,89.44%)。结论本研究建立的猪附红细胞体病PCR诊断方法及临床应用,为辽宁地区乃至全国附红细胞体病的防治工作提供了科学理论数据。

摘要：根据2003年Hoelzle发表的猪附红细胞体的基因组序列(AJ504999)设计一对特异性引物,对病料样品进行PCR扩增并将其产物克隆到pMD18-T载体后测序,结果表明扩增出的片段为603bp,同源性分析表明该序列与参考基因组序列同源性为100%,反映出我国分离株与国外株其基因无差异,特异性和敏感性试验表明,所建立的PCR诊断方法与常见的支原体、细菌及原虫无交叉反应,能检测到猪附红细胞体血液基因组DNA最低量为0.65ng/mL,该方法具有快速、特异、敏感等特点,为猪附红细胞体病的快速诊断及流行病学调查提供了新的手段。