摘要：目的神经元纯化是各种神经细胞实验研究必不可少的实验步骤,但目前少见神经元纯化过程中各种因素对神经轴突影响的实验报道。探讨简便有效的背根神经节神经元(dorsal root ganglion neurons,DRGn)细胞纯化方法和神经元培养体系内相关因素对β3-tubulin阳性神经轴突生长状态的影响。方法取新生3d的SD大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)制成细胞悬液,根据玻片包被底物不同分为D-多聚赖氨酸(poly-D-lysine,PDL)组、PDL/层粘连蛋白(Laminin,LN)组和Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)组,分别差速贴壁10、20、30、40、50、60、70、80、90、100min,倒置相差显微镜观察细胞贴壁情况,并采用免疫荧光染色观察各时间点DRGn细胞和非DRGn细胞贴壁数量。将DRG制备组织块培养72h,采用完全随机设计的方法观察底物(PDL、PDL/LN、ColⅠ)、FBS(0、5%、10%)、五氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu,0、20、40μmol/L)和阿糖胞苷(cytrarabine,Ara-C,0、10、20μmol/L)不同水平对DRG整节培养中β3-tubulin阳性轴突长度和单位阳性轴突分支末梢数量的影响。结果倒置相差显微镜和倒置荧光显微镜观察显示,细胞接种后即开始贴壁,贴壁10min后移除细胞悬液仍可见DRGn细胞及非DRGn细胞贴壁生长。PDL组:贴壁10、30min,神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)阴性(NSE-)细胞数高于NSE+细胞数(P0.05);贴壁60、70、80、90、100min,NSE+细胞数大于NSE-细胞数(P0.05);贴壁70、80、90、100min,NSE+细胞数大于NSE-细胞数(P0.05);5-Fu在0浓度水平时β3-tubulin单位阳性轴突分支末梢数及阳性轴突长度均最大,与20、40μmol/L浓度水平比较差异有统计学意义(P<0.05);Ara-C在0和10μmol/L浓度水平的阳性轴突分支末梢数相同,均高于20μmol/L水平(P<0.05);而阳性轴突长度在10μmol/L水平时最长,与0和20μmol/L浓度比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论将DRGn细胞悬液在PDL包被的玻片上差速贴壁30min,再将悬液吸出进行接种培养,可在一定程度上起到分离纯化神经元细胞的作用。行DRG整节培养时,选择神经元专用培养基联合PDL/LN细胞培养底物和10μmol/LAra-C,可获得最理想的β3-tubulin阳性轴突生长分化效果。

摘要：[目的]介绍3D打印导板辅助骶2髂骨(S2AI)螺钉置入技术。[方法] 2016年6月～2018年1月,本院收治需使用骶2髂骨螺钉内固定患者17例,男8例,女9例;年龄40～65岁。术前行骨盆CT扫描及三维重建,扫描CT数据导入Mimics软件模拟骶2髂骨螺钉钉道的长度及方向,方向确定后生成导向导管模型;根据S1-S2椎板及棘突形态设计导航模块底座;将导管及底座最终合成导板并打印成形。术中使用导航模块辅助置入骶2髂骨螺钉,记录术中每枚骶2髂骨螺钉置入时间、术中透视次数。术后复查骨盆CT扫描,复查CT数据导入Mimics软件重建骨盆。观察钉道是否穿过骶髂关节,是否穿破骨皮质,测量骶2髂骨螺钉头倾角、外倾角,测量进钉点,统计每枚螺钉数据并分析术前模拟和术后实际相关性。[结果]导板辅助下置入骶2髂骨螺钉34枚,单个螺钉置入时间(11.82±2.09) min,每名患者术中透视次数(4.47±0.94)次。所有螺钉均穿过骶髂关节、在骨皮质内。每侧螺钉术前规划进钉点、实际进钉点差异均无统计学意义(P>0.05),每侧螺钉术前规划头倾角、外倾角差异均无统计学意义(P>0.05)。[结论] 3D打印导板辅助置入骶2髂骨螺钉技术有助于个性化精准置钉,降低血管神经损伤风险,减少透视次数,缩短置钉时间。