摘要：目的构建表达抗菌肽Dermaseptin S4(DS4)及其突变体K4-S4的工程菌,并表达目的蛋白。方法采用重叠延伸PCR法设计和扩增抗菌肽DS4及K4-S4基因,定向克隆入载体pUC-18中,经酶切、测序鉴定,重组至表达载体pGEX-4T-1中,构建抗菌肽DS4及K4-S4基因表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)plyS,经IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE鉴定。结果构建的抗菌肽DS4及K4-S4基因工程菌所表达的目的蛋白,经SDS-PAGE鉴定可见相对分子质量34 000的特异性目的条带,37℃诱导5 h的蛋白表达量最高,且多数以包涵体形式存在。结论已成功构建抗菌肽DS4及K4-S4工程菌,并表达目的蛋白,为进一步研究其功能和应用奠定了基础。

摘要：目的通过干预影响残余风险的因素,分析兰州地区输血传播HIV残余风险的变化,评价关键因素调控作用的有效性,获取行之有效的HIV残余风险规避策略。方法统计2013-2018年(干预前)和2019-2020年(干预后)兰州地区无偿献血者HIV检测数据及确证结果,应用患病率-窗口期模型(prevalence-WP模型)和《献血者残余风险调查表》,对输血传播HIV的残余风险进行评估和对比分析,评价HIV残余风险规避策略的有效性。结果2013-2020年,重复献血者比例从15.49%增加到17.66%,HIV确证阳性率由0.033%降为0.018%,总的残余风险由6.54×10^(-6)降为4.14×10^(-6),初次献血者残余风险由6.96×10^(-6)降为4.30×10^(-6);重复献血者残余风险由4.26×10^(-6)降为3.36×10^(-6),说明关键影响因素调控有效。结论通过使用基于prevalence-WP模型关键影响因素设计的《献血者残余风险调查表》,增强了献血前征询的有效性,明显降低了无偿献血者HIV确证阳性率,有效降低了兰州地区输血传播HIV的残余风险。

摘要：目的构建天蚕素A(1～8)-蛙皮素(1～12)杂合基因抗菌肽(CA-MA杂合肽)突变体,在大肠杆菌中融合表达,并进行抗菌活性检测。方法采用PCR体外定点突变技术,设计1对方向相反的引物,其中1个引物引入突变点,应用高保真的PolybestDNA多聚酶进行重组表达质粒pGEX-4T-1-CA-MA的PCR扩增,使CA-MA杂合肽第16位密码子由AGT突变为TGG。将扩增片段自身连接,构建CA-MA杂合肽突变重组表达质粒pGEX-4T-1-W16-CA-MA,转化***21,IPTG诱导表达突变体蛋白W16-CA-MA,并对表达产物进行纯化。分离GST融合蛋白后,进行抗菌活性检测。结果重组突变表达质粒DNA测序结果表明,在预期位点发生了突变;突变蛋白在大肠杆菌中的表达量约占菌体总蛋白的18%;纯化后蛋白纯度可达75%以上,并具有一定的抗菌活性。结论已成功获得了具有抗菌活性的杂合肽突变体W16-CA-MA。

摘要：目的:克隆和表达Alloferon1基因2串联体.方法:利用同尾酶法基因同向串联方案,在人工合成Alloferon1全基因的基础上,将Alloferon1基因由单体连接成2串联体,继而将获得的正确Alloferon1基因2串联体插入pGEX-4T-1表达载体诱导表达.结果:构建的Alloferon1基因2串联体经酶切和DNA测序分析,结果表明该基因串联体的序列与设计的序列完全相同.Alloferon1基因2串联体插入pGEX-4T-1载体后,重组菌经37℃诱导4h,SDS-PAGE分析结果显示,该串联体得到较高水平的表达.结论:Alloferon1基因2串联体的构建与表达均获得了成功.

摘要：目的通过调查甘肃省14家血站血液检测实验室资源配置现状,探讨基础条件差异对实验室综合检测能力的影响,促进甘肃地区血站实验室血液筛查能力同质化、规范化建设,提高血液的安全性和有效性。方法构建实验室资源配置评价指标体系并设计调查问卷,收集14家血站实验室人力资源、基础设施和关键设备的相关数据,应用熵权-TOPSIS法对14家实验室资源配置进行综合评价及排名。结果甘肃地区14家血站血液检测实验室资源配置综合评价排名前3位的是实验室A、B、I,排最后3位的是G、M、J。总体来看,主要问题一是人力资源结构不合理,年龄方面大多数实验室未建立职工老中青的年龄梯队;学历方面除A实验室,其他实验室均无研究生学历人员;职称方面大多数实验室未建立以中级职称人员为核心的检验队伍。二是基础设施不配套,7家实验室面积偏小,不能满足现代化实验室检测的需求;8家血站没有核酸备用实验室,也未与其他血站建立互为备用实验室关系。三是关键设备配置不足,5家实验室无全自动血型仪,5家实验室只有一套酶免检测系统,3家实验室的关键设备均无备用设备,如果发生设备故障不能及时修复,将影响结果的发布。结论甘肃地区14家血站血液检测实验室人力资源、基础设施和关键设备均存在明显差异,将对实验室检测能力及后续发展产生较大影响,建议各级政府和卫生行政部门依据不同血站的采血量按需优化实验室资源配置的投入,通过政策调整逐步缩小不同地区之间资源分布的差异,提高实验室自动化程度,优化人员结构,全面建设优质高效的血站血液检测实验室,保障临床用血安全。