摘要：目的探讨RNA分子干扰铜绿假单胞菌MexAB—OprM外排泵MexB基因的体内效应。方法针对MexAB-OprM外排泵MexB基因设计siRNA小分子，构建干扰RNA（shRNA）表达载体，将带有小分子干扰RNA（siRNA）质粒电转入铜绿假单胞菌，从小鼠支气管内直接予以siRNA质粒干扰PAO琼脂菌体悬液（1×10^7CFU／ml）攻击，建立PA01野生型及siRNA2干扰型和siRNA阴性对照分子干扰型菌株的肺部感染动物模型。于感染后第1、2、3天腹腔注射美罗培南（100mg／kg，2次／d）。感染后第3、5、7天评估各组小鼠肺部细菌学、肺部病理学、细胞因子水平及肺组织中性粒细胞募集（MPO）水平变化。结果siRNA2干扰组小鼠，感染后3、5、7d的肺部细菌负荷明显下降。且与siRNAnon组和ScrambledsiRNA组比较，siRNA2干扰组小鼠感染早期（3d）病理学改变明显减轻；MPO及炎性细胞因子（IL-1β和IL-12）表达水平升高。而在感染后期（7d）siRNA2干扰组小鼠炎性细胞因子表达水平则下降。结论siRNA分子干扰明显增加小鼠对铜绿假单胞菌感染的抵抗力，降低肺部细菌的载量，增加早期中性粒细胞募集到感染部位并诱导铜绿假单胞菌的早期免疫应答。siRNA分子联合抗生素的治疗，为慢性铜绿假单胞菌肺部感染的治疗提供了有意义的资料。

摘要：目的制备携带谷氨酸转运体3（VGLUT3）基因小分子干扰RNA的重组慢病毒。方法设计合成短发卡RNA（shRNA）VGLUT3对应的两条互补的寡核苷酸链，mU6-MCS—Ubi—EGFP质粒经HpaI和XhoI进行双酶切与退火后的寡核苷酸连接，目的质粒转化感受态细胞，对克隆的菌落行聚合酶链反应（PCR）鉴定，再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序，测序正确的重组质粒转染293细胞，同源重组产生Lentivirus—VGLUT3-shRNA并测定病毒滴度。结果病毒滴度为1．5×10^9TU／ml。结论成功制备携带VGLUT3-shRNA的重组慢病毒。