摘要：目的了解深圳市手足口病就诊情况及其病原学特征。方法发放统一设计的手足口病监测月报表,采用由医生填写调查表的方法,对2008-2010年深圳市某手足口病监测医院的门诊就诊病例和手足口病例分别进行统计;同时随机采集调查期间431例手足口病病例粪便标本,采用荧光逆转录-聚合酶链反应(reverse tran-scription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法进行病原学核酸检测。结果 2008-2010三年共有门诊就诊病例427 458例,其中手足口病10 355例,构成比为2.42%。4～10月份病例数较多;431例手足口病病例中,肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)阳性143例,阳性率为33.18%,柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CoxA16)阳性78例,阳性率为18.10%。结论 2008-2010年手足口病就诊病例数占门诊病例数比例逐年增加,手足口病越来越受到人们的重视;2008-2010年深圳市手足口病的主要病原体为EV71,CoxA16的阳性率逐年下降。

摘要：目的:了解深圳市手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)疫情的病原学情况,为疫情的控制及病例的治疗提供可靠的实验室依据。方法:设计合成肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)的型特异性引物,提取HFMD病例粪便标本中的核酸,采用RT-PCR方法扩增病毒的特异性片段,检测EV71和CA16核酸。结果:36起手足口病疫情中,13起由EV71引起,14起由CA16引起,构成比分别为36.11%及38.89%;各个行政区均有疫情发生,主要集中在人口密集流动性较大的罗湖区和南山区;疫情主要集中在4、5月份;99份标本中,EV71采样阳性率为28.28%,CA16采样阳性率为23.23%;EV71和CA16的采样阳性率没有显著性差异;不同性别间EV71和CA16的感染率没有显著性差异。结论:2008年深圳市HFMD疫情主要是由CA16和EV71引起,特别要加强对EV71引起的有中枢神经系统并发症的重症病例的监测。

摘要：目的扩增丙型肝炎病毒核心区(HCV-Core)基因,并构建HCV-Core基因的重组表达载体。方法设计合成HCVCore基因全长引物,提取丙型肝炎患者血清中的HCV RNA,应用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增C区基因片段,用限制性内切酶BamH1和SaL1双酶切后,连接到Pet32a表达载体中,并转化到BL21大肠杆菌中;然后PCR和双酶切鉴定转化菌落。结果扩增得到目的基因长度约600bp,经测序证实为HCV-Core基因,表明HCV-Core基因重组表达载体Pet32a-Core构建成功。结论成功构建HCV-Core基因表达载体Pet32a-Core,为下一步Core蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备奠定基础。

摘要：目的通过克隆丙肝病毒非结构蛋白NS3-4A基因,构建表达HCV-NS3-4A基因的重组杆状病毒穿梭载体。方法设计合成HCV NS3-4A基因全长的特异性引物,应用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增非结构蛋白区NS3-4A基因片段,经限制性内切酶EcoR I和Hind III双酶切后克隆到pFastbacDual上,并转化到大肠杆菌DH5α中,最后经PCR和双酶切鉴定转化菌落。结果扩增得到的基因片段长度为2.2kb,该片段成功克隆在杆状病毒穿梭载体pFastBacDual上,经测序证实为HCV NS3-4A基因,这表明HCV-NS3A基因重组杆状病毒穿梭载体构建成功。结论成功构建了表达HCV NS3-4A基因的杆状病毒穿梭载体,这将为下一步HCV杆状病毒载体疫苗的制备打下基础。

摘要：目的:利用TaqMan PCR技术,建立乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)实时荧光PCR检测方法,探讨其用于临床诊断的可行性。方法:根据GenBank发表的JEV全基因组序列资料分析结果,在其3′端非编码区(UTR)设计JEV特异的引物与探针,验证检测体系的特异性、灵敏性和稳定性,并用于临床乙脑病人样本的检测。结果:引物、探针具有良好的特异性,用该TaqMan PCR法检测JEV减毒株SA14-14-2灵敏度可达1 TCID50/ml。稳定性分析表明,同一样本重复检测5次,Ct值变异系数均小于5%。在此基础上,实时荧光PCR检测了10份临床上确诊为乙脑患者的标本(特异性IgM阳性),6份阳性,阳性率为60%。在7份特异性IgM阴性、临床上疑似乙脑的患者中,2份TaqMan PCR结果为阳性,阳性率为28.6%。此方法从RNA提取到检测结果仅需1.5 h。结论:本研究建立了一种灵敏、特异、简便易行的JEV TaqMan PCR检测方法,为乙型脑炎的鉴别诊断提供了一种技术手段。

摘要：目的通过克隆肠道病毒71型结构前体蛋白P1和非结构蛋白3CD,构建共表达P1前体蛋白和非结构蛋白3CD的真核双基因表达载体。方法设计合成脑心肌炎病毒(EMCV)IRES序列的特异性引物,克隆至真核表达载体pcDNA3.0上,命名为pc-IRES。从手足口病重症患者分离EV71病毒株,经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别扩增出EV71病毒的P1前体蛋白区与3CD区的片段,并将其定向克隆至真核表达载体pc-IRES载体中IRES序列的上游和下游,随后转化到大肠埃希菌DH5α中,最后经PCR和双酶切鉴定转化菌落。结果通过重组质粒p-IRES-P1-3CD进行酶切和DNA序列分析,重组真核双基因表达载体p-IRES-P1-3CD构建成功。结论成功构建共表达EV71病毒P1前体蛋白和非结构蛋白3CD真核双基因表达载体,这将为下一步制备基于DNA载体的EV71病毒的类病毒颗粒疫苗打下基础。