摘要：本研究旨在针对水产品中活的副溶血性弧菌建立一种快速定量的PCR检测方法。基于叠氮溴化丙锭(PMA)在一定光照条件下能抑制死亡菌DNA扩增,以及微滴式数字PCR技术能将检测精度扩展至单分子目标基因,并实现绝对定量的特点,以副溶血性弧菌tlh基因为目的片段设计及筛选适合的特异性引物与探针,优化反应体系,通过对PMA浓度及曝光条件等优化,建立了一种联用PMA-ddPCR技术快速检测水产品中活的副溶血性弧菌的定量检测方法。研究结果显示:选择16μg/mL作为PMA工作浓度,曝光时间为8min,此条件下能够完全抑制副溶血性弧菌死菌的DNA扩增并对活菌扩增无影响。通过对比PMA-ddPCR和PMA-qPCR的检测低限分别为2×10^1cfu/mL、2×10^2cfu/mL,PMA-ddPCR法的灵敏度比PMA-qPCR法的高。应用PMA-ddPCR定量方法检测人工污染的基围虾和小帆立贝这两种海产品,在基围虾中最低可检出1.9×10^1cfu/g的副溶血性弧菌、在小帆立贝中最低可检出8.9cfu/g的副溶血性弧菌。该研究为将PCR技术实际应用于水产品中低量污染、活的副溶血性弧菌的定量检测奠定了基础。

摘要：本文以牛源性线粒体细胞色素B(cyt B)基因为模板,采用软件Primer Explorer Version 4设计并筛选出LAMP特异性扩增引物,通过反应体系优化建立了肉及肉制品中牛源性成分的环介导等温扩增技术检测方法,对该方法的灵敏度、特异性以及稳定性进行了验证,同时采用国标方法和商品化检测试剂盒对市售的12种牛肉及牛肉制品进行对比检测。结果表明该检测方法具有高灵敏度、高特异性和高稳定性,适用于实际的生鲜肉制品及加工肉制品中牛源性成分的鉴定。

摘要：本研究通过对咖啡基因信息的检索分析,根据咖啡的XMT1基因序列设计了一组咖啡特异性的引物与探针,建立咖啡物种特异性实时荧光PCR检测方法。对该方法进行了灵敏度、特异性和稳定性测试,结果表明,该方法能快速检测出咖啡物种特异性,定性检测体系对咖啡DNA的检测灵敏度为0.1 ng/μL,特异性和稳定性良好。