摘要：目的 观察转染Livin反义寡核苷酸（ASODN）对人胆管癌细胞株QBC939细胞Livin mRNA和蛋白表达的抑制作用及其对细胞凋亡的影响.方法 设计合成全硫代磷酸化修饰的Livin ASODN,脂质体介导Livin ASODN转染QBC939细胞,于转染后60h,噻唑蓝（MTT）法检测Livin反义寡核苷酸对QBC939细胞增殖的抑制作用,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染前后Livin mRNA表达的变化；细胞免疫荧光化学检测转染前后Livin蛋白的表达变化；膜联蛋白V（Annexin V）-藻红蛋白（PE）流式细胞仪（FCM）法检测转染后细胞凋亡变化.结果 实验分反义（Livin ASODN）组、错义（Livin NSODN）组、脂质体组、空白对照组.转染后60 h,MTT法显示Livin ASODN组能明显促进胆管癌细胞的凋亡（46.41±1.13、3.10 ±0.44、2.66±0.26、0）；RT-PCR显示Livin ASODN组LivinmRNA表达水平明显低于各对照组（54.96 ±3.00、88.31 ±2.50、85.90±0.62、90.36±2.43）（P＜0.05）；细胞免疫荧光化学法显示Livin ASODN组Livin蛋白表达明显低于各对照组（39.05±2.52、8.60 ±3.60、6.37 ±2.71、0）（P＜0.05）；流式细胞仪分析结果显示Livin ASODN组的细胞凋亡明显高于各对照组[（36.98±4.09）％、（3.77±0.25）％、（7.51±0.30）％、（6.83±0.23）％].结论 脂质体介导转染Livin ASODN能特异性抑制QBC939细胞中的Livin基因表达,下调Livin蛋白的表达,抑制胆管癌细胞增殖,并诱导细胞凋亡.

摘要：目的探讨基因枪转导突变特异性K-ras si RNA对胰腺癌细胞生长的抑制作用。方法根据胰腺癌细胞系突变特征,设计突变特异性K-ras si RNA;应用基因枪将si RNA转导入胰腺癌细胞系,提取总RNA和胞浆蛋白;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Westernblot)方法,检测基因枪转导突变特异性K-ras si RNA对突变型K-ras基因表达的干扰作用;行细胞爬片K-ras p21蛋白免疫组织化学染色,探讨si RNA对K-ras p21蛋白表达的抑制作用;采用CCK-8(cell counting kit-8)活细胞计数法,绘制转基因前后细胞生长曲线,观察si RNA的抑瘤效果。结果RT-PCR结果显示,K-ras突变特异性si RNA,能有效抑制K-ras基因表达(P<0.05);Westernblot和免疫组织化学结果表明,K-ras p21蛋白的表达明显降低(P<0.05);细胞生长曲线显示,转导si RNA组较对照组细胞生长明显受抑制(P<0.05)。结论基因枪可以有效地对小片段双链si RNA进行细胞内转导;突变特异性K-ras si RNA,可显著下调胰腺癌细胞系突变型K-ras mRNA及K-ras p21蛋白表达,并能有效抑制肿瘤细胞的增殖。