摘要：为实现转基因甜菜品系H7-1的标识管理和精准定量,根据H7-1的5’边界序列和甜菜谷氨酰胺合成酶基因(glutamine synthetase,GS)设计引物和探针建立双重数字PCR检测体系。该方法的特异性、灵敏度、精密度和准确度均进行了测试。结果显示:建立的转基因甜菜H7-1数字PCR检测方法特异于H7-1品系检测,在20μL反应体中H7-1品系特异性序列和内源基因GS的定量下限(limit of quantitation,LOQ)分别为3.1拷贝/μL和6.3拷贝/μL,检测下限(limit of detection,LOD)检出限分别为0.6拷贝/μL和1.3拷贝/μL,精密度和准确度在可接受范围内,该定量方法不依赖于标准曲线建立,可便捷的应用于转基因甜菜H7-1成分的精确定量检测。

摘要：本文的设计内容为扳手冲裁模设计,利用的是级进模生产。本设计重点是在分析冲裁变形过程及冲裁件质量影响因素的基础上,主要介绍冲裁件的工艺性分析、确定冲裁工艺方案、选择模具的结构形式、进行必要的工艺计算、选择与确定模具的主要零部件的结构与尺寸、校核模具闭合高度及压力机有关参数、绘制模具总装图及零件图都是这次设计的主要内容。

摘要：分析了砾岩层的特殊性,介绍了义桥煤矿主井厚砾岩层冻结施工方法。建议在遇到类似地层时,可调整冻结设计参数,以达到较好的冻结效果。

摘要：简要介绍西门子S7-400H冗余PLC系统,并具体阐述了两个互为冗余PLC的主备运行信息、电池信息、冗余Profibus-DP网络信息和Y-LINK下属Profibus-DP网络信息的诊断。S7-400H系列冗余PLC在核电站环吊、干熄焦提升机等高可靠性控制要求场合,能较好地满足功能要求,冗余设计大大提高不间断运行时间,而对冗余PLC相关信息进行诊断并在上位机进行显示,可显著减少故障排查时间,利于快速恢复系统运行。

摘要：本文根据红薯单拷贝物种基因β-淀粉酶基因(Ipomoea batatas beta-amylase gene,β-AMY)特异性片段设计引物组和探针,建立了红薯成分特异性定量检测的微滴数字PCR检测方法及β-AMY基因拷贝数浓度(copy number/μL)与红薯质量(mg)的线性关系,并对方法的特异性、灵敏度和适应性均进行了测试。结果显示建立的红薯成分数字PCR检测方法特异于红薯成分检测,在20μL反应体系中定量下限(limit of quantitation,LOQ)和检测下限(limit of detection,LOD)分别为2.53 copies/μL和0.67 copies/μL。根据建立的拷贝数浓度(copy number/μL)与红薯质量(mg)的线性关系,对红薯质量百分比为5%和25%的样本进行定量检测,检测结果经换算得到的红薯含量分别为4.15%和21.33%,回收率分别为83.06%和85.31%,RSD值在6.33%~6.95%之间,表明本方法可对质量百分比为5%及以上的红薯成分进行准确定量,在定量检测方面具有较大应用潜力,可为市场监管提供了技术支持。

摘要：建立基于TaqMan探针双重重实时荧光PCR检测肠道沙门氏菌(Salmonella enterica,SP)和肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis,SE)的方法。根据SP的aceA基因(Gen Bank:U43344.1)、肠炎沙门氏菌特异序列SEP(GenBank:AF370707.1),分别设计引物和探针,在ace A探针的5′端标记FAM和SEP探针的5′端标记VIC,建立基于TaqMan探针双重荧光PCR检测方法。试验结果,58株29种不同血清型肠道沙门氏菌均扩增出ace A基因扩增曲线,SEP特异性地扩增出15株SE,而28种不同血清型沙门氏菌和17株变形杆菌等阴性对照株扩增结果均为阴性。ace A和SEP的双重荧光PCR扩增效率分别为100%和104%,R2分别为0.999和0.998,最低检测浓度分别达到280 cfu/m L和260 cfu/m L。建立的方法特异性好、灵敏度高,整个试验可在31 h完成,是快速检测SP和SE的有效方法,可用于食品中SP和SE的特异性检测。

摘要：目的为实现转基因甜菜GTSB77的标识管理,建立其品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法。方法针对GTSB77的3’端外源插入片段与甜菜基因组DNA之间的邻接区序列设计引物和探针,建立GTSB77品系特异性实时荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果建立的GTSB77检测方法特异性强,定量限(LOQ)为16拷贝,扩增效率为102%,重复性测试结果相对标准偏差(RSD)介于0.21%~1.66%之间。结论建立的实时荧光PCR方法可应用于GTSB77的鉴定检测。

摘要：目的为实现转基因北极苹果(Arctic^(TM) apple)目的标识管理,建立特异性实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法针对转基因北极苹果特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立转基因北极苹果实时荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果建立的转基因北极苹果实时荧光PCR特异性强,定量检测限为20拷贝,扩增效率为96%,检测重复性良好。结论建立的特异性实时荧光PCR法可应用于转基因北极苹果的鉴定。

摘要：基于微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)技术建立了定量分析马铃薯成分的检测方法。选取马铃薯的单拷贝光诱导组织特异性ST-LS1(light-inducible tissue-specific)基因作为目标基因,建立了马铃薯ST-LS1基因拷贝数浓度与马铃薯样品质量之间的线性关系;然后采用模拟样品验证该方法的准确性和适用性。结果表明:所设计的STLS1基因引物及探针具有良好的特异性,可对质量分数为5%及以上的马铃薯成分进行准确定量。此方法适用于市场监管中掺假鉴别及定量检测。

摘要：本试验旨在建立检测化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes,***)特异、灵敏的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。根据GenBank公布的化脓隐秘杆菌溶血素(pyolysin,PLO)基因高保守序列,设计特异性引物和探针建立检测体系,用于化脓隐秘杆菌的快速检测,并对该方法的特异性和灵敏度进行检测。结果显示,本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法仅对化脓隐秘杆菌的检测结果为阳性;该方法最低检测DNA浓度为77.6fg,最低检测细菌浓度为63CFU/mL。采用本研究建立的方法检测23份林麝临床病例样品,共鉴定出16株化脓隐秘杆菌,与API Coryne生化鉴定方法的结果相同。本研究为化脓隐秘杆菌的检测提供了一种灵敏、特异、快速的检测方法,其可用于化脓隐秘杆菌的诊断和流行病学调查。