摘要：目的构建以大鼠结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)基因为靶点的短发夹RNA(shRNA)表达质粒。方法根据前期筛选出的对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计一对有短发夹结构的RNA干扰(RNAi)靶点序列,退火形成双链DNA,克隆到质粒载体psiRNA-h7SKGFPzeo;构建重组质粒载体psiRNA-GFP-CTGF和psiRNA-GFP-TIMP-1,并进行酶切与测序鉴定。结果酶切与序列测定均提示重组质粒psiRNA-GFP-CTGF和psiRNA-GFP-TIMP-1构建成功。结论成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1最有效的RNAi靶位的shRNA表达质粒,为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径打下了实验基础。

摘要：目的筛选能有效抑制肝纤维化形成的结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的RNA干扰靶位。方法根据大鼠CTGF和TIMP-1基因序列,分别设计3个RNA干扰候选靶位,化学合成双链RNA(dsRNA),各自转染或不同组合后转染经TGF-β1刺激活化的大鼠肝星状细胞(HSC),48h后抽提RNA并逆转录成cDNA,采用荧光定量PCR法测定并计算CTGF和TIMP-1、Ⅰ型前胶原(procol-α1)mRNA的相对表达量与抑制率,采用RIA法检测HSC培养上清液肝纤维化指标。结果在进行单独针对CTGF基因干扰时,CTGF-3组对CTGF mRNA及其下游产物Procol-α1 mRNA的转录抑制作用最佳(抑制率分别达68.09%与65.03%),在单独针对TIMP-1基因干扰时,TIMP-1-3组对TIMP-1 mRNA及其下游产物Procol-α1 mRNA的转录抑制作用最佳(抑制率分别达68.55%与62.84%);在联合干扰时,CTGF-3/TIMP-1-3组联合对CTGF mRNA和TIMP-1 mRNA的抑制最强(抑制率分别达76.60%与79.03%),而以CTGF-2/TIMP-1-3组联合对Procol-α1 mRNA的抑制作用最强(抑制率达85.79%)。结论成功筛选出针对CTGF和TIMP-1最有效的RNA干扰靶位,联合干扰较单独干扰效果更强。

摘要：新课程改革的实施已经好几年了，新课标的实施给数学课堂教学注入了新鲜血液，现在的问题是如何进行新课标下的数学课堂教学最有效，这就对我们每位教师提出了严峻的挑战：第一：要把握课堂教学环节的设计，注重学生基础知识和基本技能的掌握与提高；

摘要：针对现行的结构抗震设计规范没有考虑双震中地震动对结构性能的影响问题,引入同时反映位移超越及能量耗散影响的双参数损伤模型进行结构损伤评估,可以更好地反映结构构件在不同类型地震动作用下的损伤发展规律.比较4种构件的双参数损伤模型,并对其中一种模型进行改进.对汶川地震中一典型的9层框架结构进行三维非线性地震响应分析,研究结构损伤规律.分析结果表明,结构主要的损伤积累发生在第一次主震中.结合现行抗震设计规范,提出一种直接基于目标损伤指标的结构抗震设计方法,通过一简单算例验证了该方法对大震作用下结构抗震设计的适用性.

摘要：目的了解湖南省贫困农村地区6～24月龄婴幼儿营养包服用不适反应现状及相关因素。方法于2015年采用概率比例规模抽样和系统抽样相结合的方法,抽取湖南省25个贫困县7481名6～24月龄农村婴幼儿,自行设计问卷调查婴幼儿的基本信息、营养包喂养方式及产生的不适反应等;采用单因素分析6～24月龄婴幼儿营养包服用不适反应的相关因素。结果婴幼儿营养包发放率为90.9%(6799/7481),有效服用率为69.2%(4707/6799),有54.3%(3695/6799)的婴幼儿没有坚持每天吃营养包;服用营养包之后报告的不适反应率为10.6%(719/6799),占总调查人数的9.6%(719/7481)。不同月龄组的婴幼儿营养包服用不适反应率的差异有统计学意义(χ~2=9.330,P=0.009),随月龄增加,营养包服用不适反应率呈下降趋势(χ~2=9.080,P=0.003)。不同月龄组、民族、厂家、是否为早产儿、发烧以及腹泻的婴幼儿营养包服用不适反应率差异有统计学意义(P<0.05)。婴幼儿服用营养包产生不适反应后,35.9%的看护人对婴幼儿完全停止喂养营养包,只有16.0%的看护人坚持对婴幼儿喂养营养包。24.7%(1677/6799)的看护人知晓营养包的主要知识,6.5%(444/6799)的看护人完全不了解营养包有关知识;85.4%的看护人通过乡村医生获得过营养包相关知识,通过电视、广播获得营养包相关知识的人低于10%。结论湖南省贫困农村地区婴幼儿营养包服用不适反应率较高,不同月龄组、民族、厂家、是否为早产儿、发烧以及腹泻是婴幼儿营养包服用不适反应的影响因素,看护人营养包知识知晓率较低。

摘要：世界技能大赛是世界技能组织（简称WSI）举办的世界顶级赛事。世界技能组织成立于1954年,目前已有70个国家和地区成员,其宗旨是：通过成员之间的合作,促进青年人和培训师的职业技能和水平的提升,并积极推广职业技能,加强各国在职业技能领域的合作与交流。世界技能组织自1989年起每两年举办一次世界技能竞赛,被称为世界＂技能界的奥林匹克＂。

摘要：【目的】建立一种检测牛分枝杆菌的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR,为防控牛结核病提供技术支持。【方法】根据牛分枝杆菌特异性基因序列(***87961,gi9954088)设计合成一对扩增牛分枝杆菌的特异性引物,从引物设计、各成分配比、样品采集及样品DNA提取等方面进行优化,并对建立的方法进行标准曲线、溶解曲线分析及特异性、敏感性、重复性、临床样品检验试验。【结果】牛分枝杆菌SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR的检测模板范围为1.0×109～1.0×10拷贝/μL时,其标准曲线呈良好的线性关系,溶解曲线表现为单一波峰,Tm值为86.48～86.65℃。SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的牛型分枝杆菌扩增结果为阳性,其他参试菌株均为阴性;可检测出10拷贝/μL的牛分枝杆菌DNA,敏感性是常规PCR的100倍;Ct值变异系数小于5%,重复性好;对50份PPD检测为阳性的牛鼻黏液、牛奶和淋巴结进行检测,其结果与常规PCR检测结果一致。【结论】建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR具有快速、便捷、准确等优点,适合于牛分枝杆菌的鉴别诊断。