摘要：新时期以来,伴随着国民经济的飞速发展,建筑业得到了飞速发展,高层建筑林立而起,其中基础工程也越来越受到人们的关注。在建筑工程中,基础是最关键的一个环节,它的稳定与否将直接影响到整个建筑物的安全和人身的健康和财产的安全。所以,要对建筑基础进行科学的设计,并正确运用施工技术,以达到整体建筑的安全可靠性。建筑基础的建设往往受到各种地下环境的制约,特别是在某些特殊的地质情况下,会受到土层性质、地下水、地下岩溶溶洞发育等地质条件的制约,从而给整体的设计和施工造成很大的困难。所以,要明确建筑结构基础设计中的各类要点,才能使基础工程得到既经济又安全的效果。

摘要：在城市化进程中,老旧建筑越来越受到重视。同时,对已有的建筑工程进行加固,可以增强结构的稳定性与承载能力,从而延长其使用寿命。一般普通老旧的建筑物多数为钢筋混凝土结构,主要构件为混凝土柱、梁、板等,为满足当前建筑需求的前提下,必须承受附加荷载效应,尽管由于外部环境的影响,原构件的性能和成分都有了很大的变化,但是实际情况却与设计规范相吻合。本文章通过对钢筋混凝土结构的基本设计原理的分析,对常用的加固方法进行了深入的分析。

摘要：Ⅰ型内含子核酶经过设计特定的信号引导序列(IGS),可特异性地定点剪接目的基因RNA,从而在RNA水平达到修复病变基因的目的。以四膜虫材料,克隆了其26SrRNA内含子核酶基因,体外转录证实该I型内含子核酶具有完全的自我剪接的功能。为检测该核酶的反式剪接功能,构建了缺失后半段564bp基因序列的绿色荧光蛋白(GFP)的截短突变体重组质粒XYQ5XYQ10pEGFPC2,并证实其失去了发射绿色荧光的活性。利用PCR和分子克隆技术,构建了以上EGFP突变体的反式剪接修复核酶ptransribCMV2,该核酶载体以克隆的26SRNA内含子为核心,选择EGFP编码区194位TG为剪接位点,以188193位设计IGS序列,核酶3′端携带195890bp的EGFP基因序列,连接于pRCCMV2真核表达载体中。体外转录突变EGFP的原核表达载体XYQ510pGEM和ptransribCMV2,以混合转录产物为模板进行RTPCR,电泳及测序证实产物中含有反式剪接修复的野生型EGFPmRNA,从而证实构建的反式剪接核酶具有体外反式剪接功能。将截短突变重组质粒XYQ5XYQ10pEGFPC2与核酶质粒ptransribCMV2共转染Hela细胞,用荧光显微镜观察转染结果,发现有少量共转染的Hela细胞发出绿光;RTPCR检测出野生型EGFPmRNA,证明构建的反式剪接核酶具有体内反式剪接的功能,但其反式剪接效率低。

摘要：【目的】构建含有人巨细胞病毒(CMV)调控表达的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因真核表达质粒pCMV-TK-IRES-EGFP。【方法】设计HSV-tkcDNA的特异引物,PCR扩增获得HSV-tk基因序列,将PCR产物进行T载体克隆获得重组质粒pMD18T-TK,测序分析选定序列正确的克隆提取质粒,用限制性内切酶SalⅠ和BamHⅠ分别酶切pMD18T-TK和pCMV-IRES-EGFP质粒,将HSV-tk基因定向亚克隆至pCMV-IRES-EGFP载体,酶切鉴定,构建获得含EGFP和HSV-tk基因的重组质粒,Lipofectin介导转染小鼠黑色素瘤B16细胞并检测其表达情况。【结果】酶切见特异酶切图谱,该质粒在瞬时表达时获得EGFP的良好表达。【结论】含HSV-tk和EGFP基因真核表达质粒pCMV-TK-IRES-EGFP构建成功,为利用绿色荧光蛋白标记在后续实验中进行自杀性基因治疗的深入研究奠定了基础。

摘要：目的:构建抑制人血管内皮生长因子C(VEGF-C)基因表达的RNA干扰(RNAi)逆转录病毒表达载体pSIREN-VEGF-C。方法:根据GenBank中VEGF-C序列,设计、合成靶向VEGF-C基因、编码短发夹RNA的两条寡核苷酸序列,退火后用T4连接酶与线性化的pSIREN载体连接,转化感受态大肠杆菌,筛选阳性克隆,抽提质粒,获得重组pSIREN-VEGF-C质粒;BglⅡ和EcoRⅠ双酶切、测序鉴定。结果:重组质粒经双酶切,证实插入片段的大小、方向均与设计的一致;测序显示序列完全正确。结论:成功构建了表达人VEGF-C shRNA的重组质粒载体pSIREN-VEGF-C。

摘要：目的构建沉默人p38MAPK基因表达的RNA干扰的逆转录病毒表达载体。方法查找人p38MAPK cDNA序列,利用软件设计并合成能够形成互补双链并能转录出靶向人p38MAPK基因的短发夹状RNA的两条寡核苷酸序列,退火后连接至线性化载体pSIREN上,获得重组质粒pSIREN-p38MAPK,酶切和测序进行鉴定。结果双酶切重组质粒获得特定的酶切图谱,证实所合成核酸片段的正确重组;测序结果显示重组核酸片段序列与设计的序列完全相同。结论成功构建了沉默人p38MAPK基因的重组质粒pSIREN-p38MAPK。

摘要：目的：构建血管抑制素(angiostatin,AG)基因真核细胞表达载体并进行转染研究。方法：根据已发表的血管抑制素基因的核苷酸序列，设计并合成一对引物，以鼠的纤溶酶原核酸为模板进行PCR扩增，将其基因克隆到真核表达载体pRC／CMV中，进行序列分析和酶切鉴定后，运用脂质体将重组质粒pRC／CMV-AG转入胰腺癌SW1990细胞中，观察其表达情况,以及其对血管内皮细胞生长的作用。结果：PCR扩增出一长1.4 kb的片断，酶切和序列分析证明含完整的AG基因序列，与已知的血管抑制素基因的同源性很高（>96％）。Western blot证实重组体pRC／CMV-AG有较高的表达，对血管内皮细胞的生长有一定的抑制作用。结论：重组体pRC／CMV-AG是一种高效真核表达载体；克隆的AG基因能抑制血管内皮细胞的生长。

摘要：目的:克隆人B7-1全长cDNA以构建相应腺病毒表达载体。方法:根据B7-1基因序列设计并合成可扩增B7-1 cDNA的特异性引物,用RT-PCR法从骨髓细胞总RNA中扩增B7-1 cDNA,并克隆至pGEM-T载体中,经酶切鉴定后再行序列分析。结果:逆转录多聚酶链反应扩增产物长度与预期的889 bp一致;用M13正、反向引物行序列测定,证实克隆出的序列与GenBank的B7-1 cDNA序列完全一致;人B7-1全长cDNA被成功地插入到质粒pGEM-T中。结论:克隆人B7-1全长cDNA为构建相应腺病毒表达载体及应用B7-1行肿瘤免疫基因治疗提供了可能性。

摘要：目的:克隆人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子全长cDNA以构建相应腺病毒表达载体。方法:根据人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因序列设计合成可扩增人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子cD-NA的特异性引物,用RT-PCR法从骨髓细胞总RNA中扩增人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子cDNA,并克隆至pGEM-T载体中,经酶切鉴定后再行序列分析。结果:逆转录多聚酶链反应扩增产物长度与预期的456 bp一致;用M13正、反向引物行荧光测序,证实克隆出的序列与GenBank的人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子cDNA序列完全一致;人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子全长cDNA被成功地插入到质粒pGEM-T中。结论:克隆人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子全长cDNA为构建相应腺病毒表达载体及应用B7-1行肿瘤免疫基因治疗提供了可能性。

摘要：目的构建结核杆菌热休克蛋白70(mycobacterium tuberculosis heat-shock proteins 70,mtHSP70)和自杀基因单纯疱疹病毒-胸苷激酶(herpes simplex virus-thymidinekinase,HSV-TK)双基因真核共表达质粒pCMV-mtHSP70-IRES-TK。方法登录Genbank查询HSV-TK和mtHSP70基因mRNA序列,应用引物设计软件DNA club分别设计扩增HSV-TK和mtHSP70基因全长cDNA的特异引物。以pcDNA3-TK质粒或mtHSP70质粒DNA为模板,分别采用各自的引物,用prime STAR HS DNA Polymerase进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),获得HSV-TK和mtHSP70基因cDNA片断,连接到T载体pMD18-T上,转化大肠杆菌TG1后用HSV-TK和mtHSP70基因的特异引物进行菌落PCR,确定含有阳性mtHSP70或HSV-TK重组质粒并将阳性pMD18T-TK重组质粒和pMD18T-mtHSP70重组质粒进行上、下游测序,测序结果与基因序列进行同源比较。选定正确的质粒用于HSV-TK和mtHSP70基因的亚克隆,构建质粒PCMV-mtHSP70-IRES-TK,所得阳性克隆摇菌后少量提取质粒,分别用NotⅠ单酶切及EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切进行酶切鉴定。结果构建的pCMV-mtHSP70-IRES-TK质粒分别用NotⅠ单酶切及EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切进行酶切鉴定,酶切产物电泳见特异酶切图谱,确定为重组质粒pCMV-mtHSP70-IRES-TK。结论本实验为后续研究mtHSP70/HSV-TK双基因的协同抗肿瘤作用奠定了实验基础。