摘要：【目的】探索吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007(Burkholderia pyrrocinia JK-SH007)合成生长素吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid, IAA)的能力,并阐明*** JK-SH007存在色氨酸依赖型的吲哚-3-乙酰胺(indole-3-acetamide, IAM)IAA合成途径。【方法】使用Salkowski比色法和酶联免疫吸附法(ELISA)进行L-色氨酸对*** JK-SH007合成IAA能力影响的检测;以*** JK-SH007全基因组为模板,设计特异性引物克隆iaaM和iaaH基因,并使用生物信息学方法对其蛋白质和亲缘关系进行分析;通过实时荧光定量PCR方法分析*** JK-SH007中的iaaM和iaaH基因在L-色氨酸处理下的差异表达。【结果】*** JK-SH007菌株能够合成15.663μg·mL-1的IAA,在以L-色氨酸为前体的条件下其合成IAA的量显著增加,达到了44.404μg·mL-1。iaaM和iaaH基因均含有一个完整的开放阅读框,其中iaaM基因全长1 782 bp,编码593个氨基酸,属于Aminooxidase super family家族;iaaH基因全长1 368 bp,编码455个氨基酸,属于Amidase super family家族。在L-色氨酸的处理下,*** JK-SH007中的iaaM和iaaH基因的表达量均显著增加。【结论】*** JK-SH007具有合成IAA的能力,L-色氨酸对其合成IAA具有显著促进作用,且克隆得到了iaaM和iaaH基因,其在进化上具有一定的保守性,证明*** JK-SH007中存在吲哚-3-乙酰胺IAA合成途径。

摘要：植物重金属ATP酶(heavy metal transporting ATPase, HMA)涉及植物对重金属的吸收、转运、解毒和富集等过程。根据苎麻(Boehmeria nivea)转录组测序结果中HMA基因的保守序列设计特异性引物,采用RACE (rapid-amplification of cDNA ends)技术从苎麻中获得了HMA全长cDNA序列(Genbank:2209492)。该基因cDNA全长为2 811 bp,含有一个2 487 bp的开放阅读框,编码蛋白含828个氨基酸,分子量为90.70 kDa,等电点(p I)为8.84,属于P-type ATPase家族成员。与川桑(Morus notabilis)、白梨(Pyrus bretschneideri)的相似性高达80%以上。亚细胞定位预测BnHMA1定位在叶绿体, qRT-PCR分析表明BnHMA1在苎麻中的相对表达量依次为叶片>茎皮>根部>茎秆。镉(Cadmium)胁迫前后镉敏感品种‘湘苎3号’叶片、茎秆和根中BnHMA1表达量高于其他两个品种,基因表达的差异化可能是苎麻品种耐镉能力不同的原因之一。

摘要：【目的】克隆吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007(Burkholderia pyrrocinia JK-SH007)多聚半乳糖醛酸酶基因(BpPG),并阐明Bp PG基因在*** JK-SH007定殖中的生物学功能。【方法】通过设计特异性引物(PG-F、PG-F)克隆Bp PG基因,并对其全长基因进行生物信息学分析;采用MEGA 5.0软件进行系统发育树分析;将*** JK-SH007接种杨树,利用实时荧光定量PCR方法,分析Bp PG基因在*** JK-SH007定殖过程中的差异表达。【结果】Bp PG基因全长2 001 bp,编码666个氨基酸,预测蛋白质分子量69.23 ku,理论等电点为8.37;Bp PG蛋白有6个蛋白质结合位点,属于Glycosyl hydrolases family 28家族,为亲水性蛋白,不具有信号肽。二级结构主要包括α-螺旋、β折叠、延伸链和无规则卷曲,三级结构预测结果与二级结构相符。系统进化分析表明,Bp PG与PG(Gen Bank序列号WP 034181566.1)具有同源性。实时荧光定量PCR结果显示*** JKSH007定殖过程中,不同时期的Bp PG基因表达量存在差异。【结论】克隆得到Bp PG基因,Bp PG基因在进化上是保守的,其极有可能在*** JK-SH007定殖过程中发挥作用。

摘要：拙政园是园林艺术的宝贵遗产,其入口空间的变化直接影响游人的入园体验。研究拙政园不同时期的入口空间特征,对园林古建的保护及现代园林入口空间设计具有一定启示意义。基于视域分析法,利用参数化软件Grasshopper对三个时期的拙政园园林入口空间序列进行量化对比分析,相关指标包括最大直径(MaxDiam)、直径方差(Var Radial)、视域面积(Iosvist Area)、圆度(Circularity)、游离度(Drift)等,进而研究并总结其空间结构的变动对空间视域和游览体验的影响。

摘要：住院病案酋页信息的采集与质量控制在DRGs的研究与应用中是非常关键的基础性工作。本研究介绍了北京市对各医院上报的住院病案首页信息进行督导检查的抽样方法、检查内容、检查方法、数据汇总方法、上报信息质量评分方法等内容，并介绍了2014年开展全市督导检查的结果情况，显示了督导检查取得的显著效果。

摘要：针对小鼠ERO1α基因构建短发卡RNA(Short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体。根据NCBI中小鼠ERO1α基因序列,设计3条针对ERO1α的shRNA序列和1条阴性对照shRNA序列。将shRNA序列连接到慢病毒载体pCD513B-U6上,同时进行PCR鉴定及测序,分别命名为pCD513B-ERO1α-shRNA和pCD513B-NC-shRNA。将构建好的重组质粒和包装辅助质粒共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒。将所得病毒悬液进行浓缩,同时梯度稀释转导HEK 293T细胞,检测病毒滴度。浓缩后的慢病毒转导RAW 264.7细胞,通过RT-qPCR和Western blot技术进行有效片段的筛选。之后,将筛选的慢病毒转到多种细胞系或者原代细胞,用RT-qPCR和Western blot技术检测ERO1α基因的表达情况。PCR及测序结果表明,重组慢病毒干扰载体pCD513B-ERO1α-shRNA构建成功,所包装的慢病毒其病毒滴度为5×10^7 TU/mL^10×10^7 TU/mL。RT-qPCR和Western blot结果表明,pCD513B-ERO1α-shRNA-3抑制ERO1α表达的效果最好,干扰效率在80%左右。pCD513B-ERO1α-shRNA-3能够转导多种细胞,并显著抑制ERO1α的表达,干扰效率在70%~90%。成功构建针对小鼠ERO1α基因的shRNA重组慢病毒载体,为进一步研究ERO1α功能奠定了技术基础。

摘要：乙醇注入结合硫酸铵主动载药技术制备马钱子总碱脂质液晶纳米粒(LLCN)。在筛选并确定脂质体制备方法的基础上,选择磷脂-胆固醇比、脂-药比、硫酸铵浓度、乙醇的体积为影响因素,以LLCN包封率为考察指标,单因素分析确定响应值,正交设计L_(9)(3^(4))优化处方参数,电镜检测LLCD的粒径、表面电荷,分析其稳定性。实验得出的最佳工艺参数为:磷脂-胆固醇比6:1、脂-药比为10:1、硫酸铵浓度0.2 moL/L、乙醇的体积12 mL/100 g, LLCN的表证和稳定性均符合制剂标准。