摘要：本研究应用ＡＢＣ免疫组化技术显示，奶油黄、液氮致局部冻伤及ＣＣｌ＿４所致的三种肝损伤中也有细胞角蛋白（ＣＫ）异常表达肝细胞。（１）在局部肝冻伤及奶油黄性肝损伤中表明不伴脂肪变性的肝细胞坏死不能直接引起肝细胞ＣＫ表达的改变；（２）在奶油黄性肝损伤中显示了卵圆细胞对肝细胞ＣＫ异常表达的诱导作用，表明层粘连蛋白（ＬＮ）可能是这种作用的媒介；（３）在ＣＣｌ＿４致慢性肝损伤中表明肝细胞ＣＫ异常表达和ＬＮ异常沉积无论在位相上还是在时相上都一致，提出肝小叶结构破坏可能也是通过ＬＮ异常沉积而影响肝细胞的ＣＫ表达；（４）应用电镜及免疫电镜技术表明ＣＣｌ＿４性肝损伤中肝细胞中间丝细胞骨架结构的改变伴随着ＣＫ１９阳性抗原决定簇的出现；（５）设计了一种局部肝冻伤模型，利用这种模型表明，ＣＫ１９阳性肝细胞在肝小叶结构完整性遭到破坏且伴纤维组织增生时出现，随小叶结构的恢复而消失。这是对关于肝细胞ＣＫ异常表达是肝小叶结构修复过程中局部肝细胞的修复性反应这一假说的有力支持。讨论了这种改变的意义。

摘要：本文采用纯化蛋白Hsp70-NP,NP,Hsp70分别免疫C57/BL6小鼠,取各组小鼠脾淋巴细胞进行淋巴细胞增殖试验和细胞毒试验。此外,为了获得细胞毒实验的靶细胞,本文还采用脂质体介导质粒pcDNA3.1/S转染黑色素瘤细胞B16,通过G418筛选稳定克隆,并用RT-PCR,Westernblots以及免疫荧光染色证实N蛋白在胞浆中表达。淋巴细胞增殖实验表明,Hsp70-NP,NP组小鼠脾淋巴细胞均能够对体外抗原刺激产生增殖反应,而Hsp70-NP组的增殖指数明显高于NP免疫组。细胞毒实验结果表明,LDH的释放具有效应细胞依赖性,Hsp70-NP,NP免疫组脾淋巴细胞均可以特异性杀伤靶细胞B16-N,而Hsp70-NP免疫组的杀伤率显著高于NP免疫组。实验结果显示,Hsp70可以增强NP诱导产生特异性CTL的能力。本研究结果为进一步设计基于NP的合成肽疫苗或基因疫苗提供了重要实验依据。

摘要：目的 :实现二硫键稳定的抗肝癌单链抗体与PE38融合 ,免疫毒素在大肠杆菌中的可溶性表达 ,为下游的活性检测等工作打下基础 .方法 :设计了两种不同的表达载体(GST、硫氧还蛋白促可溶表达载体 ) ,并通过改变宿主菌菌株、IPTG诱导浓度、诱导温度及诱导时间等 ,优化表达条件 ;通过ELISA法判断该免疫毒素中单链抗体的结合活性 .结果 :抗肝癌单链抗体与PE38融合蛋白在大肠杆菌Origami(DE3)的上清中得到表达 ,表达量占菌体总可溶蛋白量的2 1% ;ELISA法证实该融合蛋白保持了亲本抗体的特异性 .结论 :dsFv

摘要：目的鼠/人源化抗人肝癌单链抗体(m/hscFv_(25))融合人突变型 TNFα(mTNFα)原核表达载体的构建及表达.方法用 Oligo 软件分析并设计人 mTNFα的5′及3′端引物,化学合成并用 PCR 方法扩增 mTNFα,经限制性内切酶酶切后,连接在原核表达载体 pGEX4T-1中的 m/hscFv_(25)之后,构建成pGEX4T-1/m/hscFv_(25)-mTNFα融合蛋白表达载体,转化大肠杆菌 JM109后,通过 IPTG 诱导进行目的蛋白的初步表达.结果经 DNA 电泳分析表明,mTNFα基因全长约460 bp,并通过酶切鉴定证明成功构建了抗人肝癌单链抗体融合 mTNFα的原核表达载体,融合蛋白产物经 SDS-PAGE 显示,相对分子质量(Mr)为68 000的蛋白谱带,与预期设计完全一致,光密度扫描结果表明,GST-mscFv_(25)-mTNFα和 GST-hscFv_(25)-mTNFα融合蛋白分别占菌体总蛋白的15%和12%,表达产物主要以不溶性包涵体形式存在.结论成功构建并表达了鼠/人源化抗人肝癌单链抗体融合人mTNFα的双功能抗体基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为进一步研究 HCC 的治疗奠定了基础.

摘要：目的　观察人白细胞介素 2 (IL 2 )基因在皮肤角朊细胞中的稳定表达及分泌情况。方法　lipofectamine介导法转染 ,以G4 18筛选出阳性克隆并做扩大培养 ,用DNA斑点杂交、RNA斑点杂交、细胞铺片原位杂交、免疫组织化学、Western印迹杂交分析及噻唑蓝 (MTT)法检测外源基因在角朊细胞内的表达及分泌情况。结果　DNA斑点杂交、RNA斑点杂交、原位杂交和免疫组织化学染色均显示转染组有阳性信号 ;Western印迹杂交分析显示转染组细胞在相对分子质量为 15 0 0 0处出现一条特异性着色带 ,其位置与IL 2的相对分子质量一致 ,IL 2表达时间可持续在 1个月以上 ;MTT法检测结果显示 ,第二代、第四代转染细胞培养上清中IL 2的活性分别是 2 7 7U/ml和 15U/ml。结论　外源基因在角朊细胞内能够持续、稳定表达基因产物 ,并能分泌具有生物学活性的蛋白质。用角朊细胞作靶细胞进行基因转染、基因表达、甚至基因治疗的设计是可行的。

摘要：作者应用ABC免疫组织化学技术显示,奶油黄(DAB)、液氮致局部冻伤及CCl_4所致的3种肝损伤中也有细胞角蛋白(CK)异常表达肝细胞.①在肝局部冻伤及DAB性肝损伤模型中,表明不伴脂肪变性的肝细胞坏死不能直接引起肝细胞CK表达的改变;②在DAB性肝损伤中,肯定了卵园细胞对肝细胞CK表达改变的诱导作用,提出层粘连蛋白(LN)是卵园细胞产生的诱导物之一;③在CCl_4性肝炎及肝硬变中进行了CK和LN免疫细胞化学定位,表明肝细胞CK异常表达和LN异常沉积无论在位相上还是在时相上都密切相关,提出肝小叶结构破坏可能通过LN异常沉积而影响肝细胞的CK表达,LN等基底膜物质也是这一过程的诱导物;④在我们设计的一种局部肝冻伤模型上证实,肝细胞CK异常表达是肝小叶结构修复过程中肝细胞的适应性反应.