摘要：目的:研究人肝脏中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)及其选择性剪接体NRDR iso的生物学功能。方法:在BL21-AI菌中进行NRDR和NRDR iso表达,分离溶解包涵体。应用部分析因设计方法设计复性基质,并进行筛选。应用固相金属离子亲合层析技术(IMAC)和筛选出来的复性基质对变性的NRDR和NRDR iso进行复性和纯化。高效分子筛色谱分析复性后NRDR和NRDR iso的纯度及相对分子质量。高效反相液相色谱确定视黄醛还原酶活性,双倒数法测定酶促反应的Km和Vm ax。结果:NRDR和NRDR iso在BL21-AI菌中进行了高效表达,每毫升培养物可获得湿重为3.3 mg和1.2 mg的包涵体。经筛选确定4℃,225 mmol/L NaC l,25 mmol/L KC l,10%甘油,1%蔗糖,50 mmol/L Tris-HC l,pH 8.5为最适复性基质。应用IMAC复性后,高效分子筛色谱分析表明NRDR和NRDR iso得到较好的复性,相对分子质量分别为31.57×103和20.46×103。NRDR具有视黄醛还原酶活性,其催化酶促反应的Km和Vm ax分别为(2.7±0.18)μmol/L和(0.357±0.047)μmol/(mg.m in)。NRDR iso未检测到视黄醛还原酶活性。结论:建立了对NRDR和NRDR iso变性蛋白进行复性方法,确定NRDR具有辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶活性,NRDR iso生物学功能有待进一步研究。

摘要：通过鉴定分析人肝组织中辅酶II依赖性视黄醇脱氢酶不同剪接体全长cDNA核苷酸序列与氨基酸序列的结构特征 ,为今后进一步研究体内维甲酸的代谢情况奠定基础。根据人、小鼠NRDR编码区的一致性序列 ,设计一对引物 ,应用RT PCR方法从人肝组织中得到一条 377bp的新的cDNA片段。采用RACE法得到了NRDR新亚型cDNA ,并以生物信息学软件分析其生物学特征。测序得知该cDNA长为 1 0 0 3bp ,以NADP dependentretinoldehydroge nase reductaseshortisoform(NRDRiso)登录GenBank。其读码框为 5 2 5bp ,拟编码 1

摘要：目的检测子宫颈鳞癌组织中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶[NADP(H)-dependent retinol dehydrogenase/reductase,NRDR]及其选择性剪接亚型NRDRB1 mRNA的表达,建立SYBR实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测NRDR及其选择性剪接亚型mRNA的方法,为准确、快速分析NRDR、NRDRB1基因表达奠定基础。方法根据子宫颈鳞癌组织中NRDR、NRDRB1基因序列,设计并合成引物,将逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增的基因片段克隆至pGEM-T easy载体,重组质粒经蓝白筛选、酶切、测序鉴定后,作为阳性克隆标准品,用于标准曲线的制备,由此可定量检测出每一样品模板中NRDR、NRDRB1起始拷贝数。结果阳性克隆标准品制作的标准曲线可显示循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系(NRDR:r=0.994,NRDRB1:r=0.997),可用于NRDR及其选择性剪接亚型基因表达的起始拷贝数定量测定。结论 RQ-PCR方法较常规PCR技术更为准确、特异、灵敏,对定量检测及研究NRDR及其选择性剪接亚型表达有积极意义。