摘要：在细胞水平探讨新型脱氧核酶(ASON-Bulge-DNAzyme)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的抑制效果。针对PRRSV JX株M基因设计了2个新型的脱氧核酶,经RT-PCR、TCID50、CPE、间接免疫荧光试验(IFA)对新型脱氧核酶抑制PRRSV复制效果进行评价。结果针对M基因M-1新型脱氧核酶表现良好的抑制效果,其抑制效果高达82.7%,M-2新型脱氧核酶抑制效率最高可达到83.9%,研究表明M基因的这2个位点可能是PRRSV复制所必需的。本研究对今后PRRSV复制及基因组功能研究、抗病毒药物开发和PRRSV的致病机制及防制研究有重要意义。

摘要：研究采用5种不同干燥工艺处理枫香木材,分析对比不同干燥工艺处理材与未处理材的微观结构变化规律。结果表明:经常规、降温干燥处理后,枫香木材纹孔膜发生破裂,多发生在闭塞纹孔,且破裂程度较低;经水热预处理常规和降温干燥后,被沉积物全部覆盖的纹孔膜发生较大程度破裂;微波干燥处理后,木材纹孔膜、部分细胞壁以及导管间胞间层均出现一定程度的破裂,提高了木材内部水分迁移效率。

摘要：分析了前盖受弹丸头部撞击后破片飞散机理,根据前盖、制动环组件材料力学性能和结构设计,提出增加扩展防护圈、优化制动环组件结构方式以阻止破片后飞,采用ANSYS/LS-DYNA仿真软件计算其前盖的破碎过程,结合射击试验结果分析防护圈拓展后的安全可靠性,改进后的防护圈能可靠防止前盖碎片后飞。

摘要：干扰素(interferon,IFN)因具有广谱抗病毒、抗肿瘤活性及免疫调节作用而备受关注。本研究根据GenBank上公布的猪IFN-δ核苷酸序列设计1对引物,通过PCR方法扩增出猪IFN-δ基因,片段大小为513bp,并将其克隆到原核表达载体上得到重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌Transetta BL21(DE3)受体菌,经SDS-PAGE电泳分析,结果表明,pET-30a-DsbA-IFN-δ表达量较高,表达的融合蛋白分子质量约20ku,且主要以包涵体形成存在,经Western blotting分析发现表达的融合蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应。

摘要：根据GenBank上已公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸序列设计1对引物,用RT-PCR方法扩增出去除部分疏水区的PRRSV-M基因,并将其克隆到原核表达载体PET-30a上,得到重组质粒PET-30a-M。将重组质粒转化大肠杆菌transetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE电泳及Western blot分析,显示重组蛋白分子量约1 5.7 kD,且此蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应。

摘要：干扰素(IFN)-α因其具有很强的抗病毒活性而备受关注。本研究根据GenBank上公布的鸡IFN-α核酸序列设计1对引物,用PCR方法扩增出鸡IFN-α基因,并将其克隆到原核表达载体pET-32a及pET-30a-DsbA上,得到重组质粒pET-32a-IFN-α及pET-30a-DsbA-IFN-α。将重组质粒转化大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞,经SDS-PAGE电泳及Western blotting分析,结果表明pET-30a-DsbA-IFN-α表达量较高,表达的融合蛋白分子质量约40.4ku,表达产物主要以包涵体形式存在,且表达的融合蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应。

摘要：【目的】基于双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation, BiFC)技术研究依据猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白受体结合位点肽段的靶标肽与互补肽在活细胞内的相互作用关系以及定位情况,为进一步利用该多肽进行猪流行性腹泻病毒的检测积累前期基础和提供理论支撑。【方法】依据靶标蛋白的氨基酸组成、所带电荷种类、形成分子间氢键的能力、极性的强弱、疏水性能等理化特性设计出靶标肽;根据靶标蛋白的氨基酸组成,设计出在理论上与其相互作用的互补肽,并利用生物信息学工具对靶标肽与互补肽进行预测分析;将靶标肽与互补肽的核苷酸序列分别插入EcoRΙ/XhoΙ双酶切后的pBiFC-VC155与NotΙ/SalΙ双酶切后的pBiFC-VN173载体中,构建出BiFC真核表达载体,经酶切及测序验证正确后转染Vero细胞来研究靶标肽与互补肽的互作关系以及形成的BiFC复合物在细胞内的精确定位。【结果】生物信息学分析表明靶标肽和互补肽分别带有亲水性和疏水性结构域,亲水性结构域都带有正负电荷,能够产生静电引力;酶切鉴定和测序结果表明成功构建了pBiFC-VC155-靶标肽和pBiFC-VN173-互补肽真核表达质粒;细胞转染试验表明重组质粒共同转染后靶标肽和互补肽能够在Vero细胞内形成BiFC复合物,表明两者发生了相互作用;间接免疫荧光试验证实该BiFC复合物主要分布于细胞核中。【结论】研究证实了基于猪流行性腹泻病毒S蛋白受体结合位点肽段设计的多肽能够在活细胞内发生相互作用,表明该肽段用于检测的可行性。

摘要：根据GenBank上公布的Ptn核苷酸序列设计1对引物,利用RT-PCR的方法扩增出人类Ptn基因,将其克隆到原核表达载体pET-30a上,得到重组质粒pET-30a-Ptn。将重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞并进行表达条件优化,经SDS-PAGE电泳及Western Blotting分析表明,融合蛋白在0.5 mmol/L IPTG、37℃条件下诱导3 h表达量最高,其分子质量约24.9 kD,表达产物主要以包涵体形式存在,且表达的融合蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应。

摘要：根据GenBank上已发表的PCV2的衣壳蛋白(Cap蛋白)基因设计1对引物,利用PCR方法从已知PCV2病毒中扩增到l条DNA片段,将PCR产物克隆至pMD18-T载体上获得稳定质粒,酶切及测序鉴定后,获得大小为578 bp的Cap基因序列,将该基因插入表达载体pET-30a质粒中,获得重组质粒pET-30a-PCV2-Cap,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。重组质粒pET-30a-PCV2-Cap经IPTG诱导后表达的重组蛋白分子量为28.0kD,经破碎后SDS-PAGE电泳分析表明该蛋白具有可溶性。Western blot分析表明,该重组蛋白与PCV2阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的反应原性。

摘要：从GenBank上下载鸡传染性支气管炎病毒(IBV)H120型标准株M基因的标准序列,以此标准序列为模板设计合成一对引物。从IBV尿囊液中提取总RNA,采用PCR技术扩增出M基因,将扩增出的目的片段克隆至pMD18-T载体上获得pMD18-IBV-M质粒,通过亚克隆将目的基因连接到经过改造的pEGFP-C1-SCP-SEC载体上,成功构建真核表达质粒pC1-IBV-M。通过间接免疫荧光试验验证了构建的真核载体能在真核细胞内表达,通过动物免疫试验来检测该真核表达载体对动物的免疫保护情况。