摘要：目的:利用pEGFP6-1和pGenesil-1质粒构建针对Fas的2个短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)串联表达的栽体．方法:设计表达2个shRNA结构的互补DNA序列,经退火成双链,分别克隆至带有U6启动子的质粒载体pEGFP6-1和pGenesil-1中,构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株,扩增,提取质粒,酶切鉴定后测序分析．分别用SacI+ SalI双酶切重组质粒,胶回收酶切pEGFP6- 1-siFas1大片段和酶切pGenesil-1-siFas2小片段,T4 DNA Ligase连接酶切大、小片段,得到pEGFP6-1-siFas1+siFas2重组质粒．转化感受态细胞DH5α,扩增,提取串联重组质粒进行酶切鉴定．结果:成功构建靶向Fas的2个shRNA串联重组质粒载体pEGFP6-1-siFas1+siFas2．酶切鉴定和测序分析重组质粒,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,经酶切凝胶电泳证实载体构建成功．结论:表达2个靶向Fas的shRNA表达框成功构建在一个重组质粒载体上．

摘要：为了弥补人体寄生虫学教学课时数缩减、传统教学方式的不足,尝试将具有"短小精悍"特点的微课引入课程部分教学内容,以激发学生兴趣,补充教学内容,优化教学过程,完善课堂教学。文章结合教学经验及参加学校多媒体课件制作专项竞赛的体会,依据参加全国高校微课教学比赛微课设计的经验,以参赛作品《华支睾吸虫》的教学设计与制作为例,探讨微课设计与制作的经验、体会与设想。

摘要：文章通过利用网络资源设计人体寄生虫学课堂教学并开展教学实践活动,认为掌握搜集网络资源的方法,整合网络资源与课堂教学内容,认真开展课程教学设计,有利于课堂教学目的效果的达成,大数据时代的课堂教学需要与网络资源合理整合。

摘要：医学免疫学是连接基础医学和临床医学的重要前沿与桥梁学科，其知识抽象难懂。微课是伴随教育信息化应运而生的新型教学资源，它的设计、开发与研究已成为网络学习、移动学习的热点。在此阐述微课用于医学免疫学教学的关键因素，其中教学设计是决定微课质量的核心要素．简便易学的微课制作软件是便于微课平民化和大众化的积极保证，PPT课件是微课的重要素材；探索将零散的微课串联为知识体系，分析微课用于课程教学和人才培养的潜在价值。

摘要：目的:利用含报告基因EGFP的pGenesil-1质粒构建干扰AFP蛋白表达的短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)表达的载体,并进行活性鉴定。方法:设计表达短发夹RNA的互补DNA序列,经退火成双链,克隆至带有U6启动子的质粒载体pGenesil-1中,构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株,扩增,提取质粒,酶切鉴定后测序分析。构建正确的重组质粒经脂质体转染HepG2细胞,检测转染率和培养细胞上清的AFP含量变化,确定重组质粒的活性。结果:构建了靶向AFP蛋白的2个shRNA重组质粒载体pGenesil-1-siAFP1和pGenesil-1-siAFP2。酶切鉴定和测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,经酶切凝胶电泳证实载体构建成功。重组质粒有效转染HepG2细胞并显著抑制AFP表达。结论:成功构建具有活性的、能够表达shRNA靶向干扰AFP蛋白的2个重组质粒载体。

摘要：通过参加全国高校微课教学比赛,体会到微课的设计与制作是决定其质量的重要法宝。将微课应用于实际教学过程中,学生普遍反映此教学方式较好,绝大部分学生能自觉地在课前、课后及时观看微视频,课堂上将不懂不会的问题与教师进行互动交流;通过微习题对所学知识进行巩固,通过QQ、微信等交流工具快速与教师进行沟通。借助微课的学习,希望能够提高学生学习的主动性和积极性,达到翻转课堂的效果,期待教学质量有所提升。

摘要：目的:利用pEGFP6-1和pGenesil-1质粒构建针对小鼠Fas的2个短发卡状RNA(short hairpinRNA,shRNA)串联表达的载体pEGFP6-1-siFas1+siFas2,进一步通过BDAdeno-X系统构建腺病毒表达Fas-shRNA载体。方法:设计表达2个短发卡状RNA结构的互补DNA序列分别克隆至质粒载体pEGFP6-1和pGenesil-1中,酶切pEGFP6-1-siFas1大片段和酶切pGenesil-1-siFas2小片段,经T4DNALigase连接得到pEGFP6-1-siFas1+siFas2重组质粒。双酶切重组质粒和pShuttle2穿梭质粒,经T4DNA连接酶连接得到pShuttle2-siFas1+siFas2质粒。双酶切重组穿梭质粒,连接酶切产物和腺病毒转化感受态***5а,PCR筛选鉴定阳性克隆,进一步线性化重组腺病毒pAdeno-siFas1+siFas2质粒,经脂质体转染HEK293A细胞;收细胞进行裂解收病毒。结果:构建的重组质粒载体经酶切鉴定和测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致;重组腺病毒载体经酶切鉴定和PCR分析正确;经HEK293A细胞包装成功,能够表达绿色荧光蛋白。结论:成功构建Fas-shRNA腺病毒串联表达载体。

摘要：目的研究针对HBVX基因区设计的小干扰RNA(siRNA)表达载体质粒pGenesil-siHBVX对HepG2.2.15细胞HBV表达和复制的抑制效果及特异性。方法针对HBVX区设计siRNA表达载体质粒pGenesil-siHBVX。分别用培养液(空白对照)、脂质体Metafectene、pGenesil空载体、pGenesil-siHK(阴性对照)、pGenesil-siAFP(特异性对照)、pGenesil-siHBVX处理或转染HepG2.2.15细胞各3次。于每次转染后24h,取各组细胞培养上清液,用时间分辨荧光免疫测定技术检测上清液中HBsAg和HBeAg含量,用化学发光法检测AFP含量,用PCR荧光定量技术检测HBV-DNA复制水平。结果pGenesil-siHBVX转染能抑制HepG2.2.15细胞对HBV标志物的表达,且抑制作用随转染次数增加而增强。第3次转染后,pGenesil-siHBVX组细胞上清液中HBsAg、HBeAg和HBV-DNA检测结果分别为(6.26±1.07)ng/ml、(0.13±0.05)Ncu/ml和(3.01±0.40)×107拷贝/ml,与空白对照组的(22.50±1.39)ng/ml、(1.12±0.11)Ncu/ml和(12.33±1.28)×107拷贝/ml比较,差异有统计学意义(t值分别为12.80、12.21、9.71,P<0.05);pGenesil-siHBVX转染不影响细胞对AFP的表达(t=0.18,P=0.86)。结论pGenesil-siHBVX可以有效和特异地抑制HepG2.2.15细胞HBV-DNA的复制及HBsAg和HBeAg表达。

摘要：目的观察针对乙型肝炎病毒(HBV)X区设计的siRNA表达载体pGenesil-HBVX对HepG2.2.15细胞相应蛋白表达的影响。方法筛选出最佳转染效率的剂量配比,将阳离子脂质体METAFECTENE与pGen-esil-HBVX的复合物转染HepG2.2.15细胞,于转染后24、48、72h采用时间分辨荧光免疫测定技术(TRFIA)检测上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)。结果具有最佳转染效率而且不显著影响细胞活性的剂量配比为8μl∶2.5μg。pGenesil-HBVX转染HepG2.2.15细胞后24h,细胞上清液中HBsAg、HBeAg含量尚无显著变化(P>0.05);48h后HBsAg、HBeAg表达均有明显下降(P<0.01),并且持续至72h。结论pGenesil-HBVX可以在获得一定转染效率的基础上有效抑制HepG2.2.15细胞中HBV的表达。