摘要：为达到环保及降低施肥次数的目的,本试验设计了3个基施缓释肥与尿素处理(3个氮素水平:N_(1),纯氮300.0 kg/hm^(2);N_(3),纯氮345.0 kg/hm^(2);N_(4),纯氮390.0 kg/hm^(2)),以常规施肥(N_(2),纯氮337.5 kg/hm^(2))作为对照,探究不同氮素水平的缓释肥与尿素基施对水稻生长与产量的影响。结果显示,在水稻分蘖后期,N_(2)(常规施肥)处理下水稻的分蘖能力达到最大,其次是N_(3)处理,水稻高峰苗也是在常规施肥下达到最高,高峰苗的总体变化趋势为N_(2)>N_(1)>N_(3)>N_(4)。水稻的株高随施氮水平的增加呈逐渐增加的趋势,且N_(2)—N_(3)处理可使水稻株高控制在合适的范围。从产量结构看,有效穗数和结实率均在N_(2)处理下达到最高,而千粒质量和实粒数均在N_(3)处理下达到最高。水稻产量高低排名为N_(3)>N_(2)>N_(1)>N_(4),主要在于千粒质量和实粒数的提高导致增产。考虑到经济效益,虽在N_(3)(纯氮345.0 kg/hm^(2))处理下由于缓释肥成本高导致水稻净效益低于常规对照,但从增产、施肥次数减少以及环保等角度出发,推荐水稻缓释肥与尿素基施纯氮用量按照N_(3)(纯氮345.0 kg/hm^(2))处理来进行。

摘要：本研究旨在对水牛anti-silence factor 1a (asf1a)基因进行克隆并行生物信息学分析,并进一步筛选基于CRISPR/Cas9基因编辑系统的高效敲除asf1a基因位点。根据NCBI公布的牛asf1a基因mRNA序列设计特异性引物,以水牛GV期卵母细胞RNA反转录后的cDNA作为模板,通过PCR技术克隆获得asf1a基因序列片段,利用生物信息学分析方法,对克隆得到的序列进行和相应翻译的蛋白质进行了分析。在克隆得到的水牛asf1a基因序列上筛选3个PAM位点,并根据PAM位点构建3个gRNA载体(g1、g2、g3)以及相应的RGS载体,将pcDNA3.1-h Cas9连同gRNA、RGS 3种质粒按照3∶1∶1比例共转293T细胞,筛选高效的CRISPR/Cas9敲除位点。试验以水牛GV期的卵母细胞RNA作为模板,通过RT-PCR技术克隆获得asf1a基因序列,并据测序结果设计靶向区域筛选高效asf1a基因敲除位点。结果发现,水牛asf1a基因CDS区全长615 bp,编码204个氨基酸;多重序列分析显示,水牛asf1a基因核苷酸序列与黄牛、绵羊、猪、人、小鼠同源性分别达到了99%,98%,97%,96%,93%;蛋白质结构预测分析发现存在ASF1-hist-chap等结构,二级结构含有9个α螺旋、12个β折叠、14个T转角、14个无规则卷曲。系统进化树分析表明,水牛和黄牛亲缘性最接近。根据水牛asf1a设计的敲除载体转染293T和成纤维细胞后,细胞基因组进行T7E1酶切的结果表明,g1位点对水牛成纤维细胞敲除效率最高,达到93.82%,同时,sanger测序表明效率达17/20。本研究成功克隆了水牛asf1a基因和分析了其生物学信息,同时筛选出了asf1a的高效敲除位点,为研究水牛asf1a基因功能奠定基础。

摘要：护理是一门精细的艺术,在实际临床工作中护士与患者接触的时间最多,与患者亲属的联系也多于医生,患者从入院到出院的各项处置约有90%是由护士执行或配合完成,所以护患关系成为患者在医院直接面对的主体关系,现对作为专科医院结核科病房护患关系中的人际交流作一些探讨.