摘要：目的构建人Snail基因慢病毒干扰载体及观察干扰前后对鼻咽癌5-8F细胞增殖和侵袭的影响。方法设计Snail基因特异性RNAi靶序列,克隆至经双酶切后的plVTHM线性化载体,测序鉴定正确后,用病毒上清感染鼻咽癌细胞5-8F,流式细胞仪分选获得稳定干扰Snail基因的细胞亚系。荧光定量PCR检测mRNA表达情况;MTT法和体外侵袭实验分别测定对细胞增殖和侵袭的影响。结果plVTHM-siSnail慢病毒干扰载体构建正确。荧光定量PCR结果表明分选后的细胞Snail mRNA水平表达显著降低。干扰后的细胞增殖减慢,穿透基膜的细胞数量减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论plVTHM-siSnail表达质粒可显著下调Snail基因在5-8F中的表达,在一定程度上抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭。

摘要：目的:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)高发于中国南方,是一种恶性度较高的肿瘤,与EB病毒关系非常密切。本研究利用前期已经设计和克隆好的EB病毒(EBV)已知和预计的编码基因作为cDNA探针,用于研制EBV微阵列。利用能高产EBV病毒颗粒的B95-8细胞作为检测对象,观测基因芯片检测的效果,已确定是否将来用于临床检测。方法:87个EBV基因探针通过一对设计于载体多克隆两端的引物进行PCR扩增。产物纯化后,探针被打印在Corning玻片上。通过与Cy3标记的B95-8细胞cDNA进行杂交反应,检测B95-8细胞内EBV基因表达。RT-PCR验证检测。结果:利用构建的EBV芯片,成功地在B95-8细胞中检测到了几乎所有的EBV潜伏基因的表达,随后RT-PCR验证了该结果。结论:我们成功地构建了EBV微阵列,且设计的EBV探针检测是有效的。但EBV微阵列是否可以用于鼻咽癌标本的检测还有待进一步证实。

摘要：目的:检测Tumstatin基因在鼻咽癌发病过程中的表达变化及克隆其编码序列。方法:利用半定量RT-PCR方法检测Tumstatin在鼻咽癌组织、鼻咽癌细胞和正常鼻咽组织中的表达,比较它们之间的表达差异。设计含酶切位点的PCR引物,利用RT-PCR方法从相对正常鼻咽组织中获取Tumstatin蛋白编码序列,T/A克隆入pMD18载体中。利用PCR和酶切鉴定获得阳性重组子。重组子最后经测序证实。结果:与相对正常鼻咽组织相比,Tumstatin在鼻咽癌组织和细胞中表达下调或缺失。RT-PCR法成功获得Tumstatin基因编码区全长cDNA序列。重组克隆质粒插入片段经DNA测序后与GenBank中Tumstatin基因相应序列比较,100%同源。结论:Tumstatin在鼻咽癌组织和细胞中表达下调或缺失。采用T/A技术成功克隆鼻咽组织中Tumstatin基因,为下一步将Tumstatin亚克隆入真核表达载体pEGFP-N1,探索其在鼻咽癌生长和转移中的作用奠定了基础。

摘要：目的检测Canstatin基因在鼻咽癌发病过程中的表达变化及克隆其编码序列。方法利用半定量RT-PCR方法检测Canstatin在鼻咽癌组织、鼻咽癌细胞和正常鼻咽组织中的表达,比较它们之间的表达差异。设计含酶切位点的PCR引物,利用RT-PCR方法从相对正常鼻咽组织中获取Can-statin蛋白编码序列,T/A克隆入pMD18载体中。利用PCR和酶切鉴定获得阳性重组子。重组子最后经测序证实。结果与相对正常鼻咽组织相比,Canstatin在鼻咽癌组织和细胞中表达下调或缺失。RT-PCR法成功获得Canstatin基因编码区全长cDNA序列。重组克隆质粒插入片段经DNA测序后与Gen-Bank中Canstatin基因相应序列比较,100%同源。结论Canstatin在鼻咽癌组织和细胞中表达下调或缺失。采用T/A技术成功克隆鼻咽组织中Canstatin基因,为Canstatin亚克隆入真核表达载体pEGFP-N1,探索其在鼻咽癌生长和转移中的作用奠定了基础。