摘要：目的:探讨应用RNA激活(RNAa)技术上调p21WAF1/CIP1(p21)表达对人肺癌H441细胞增殖和凋亡的影响。方法:设计靶向抑癌基因p21WAF1/CIP1启动子DNA序列互补的双链RNA分子(dsp21),转染H441细胞后应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法检测p21WAF1/CIP1基因mRNA及蛋白质的表达变化,噻唑蓝(MTT)法检测H441细胞增殖速度的变化,流式细胞仪检测H441细胞凋亡率的变化。结果:dsp21转染H441细胞72 h后p21WAF1/CIP1表达显著上调。RT-PCR灰度比值结果显示,空白对照组、阴性对照组和实验组p21WAF1/CIP1mRNA相对表达量分别为(38.1±2.5)%、(33.5±3.9)%和(96.5±2.3)%,差异有统计学意义,F=87.0,P<0.01;蛋白质印迹法结果显示,空白对照组、阴性对照组和实验组p21WAF1/CIP1蛋白相对表达量分别为(45.7±2.2)%、(43.2±3.1)%和(93.6±2.5)%,差异有统计学意义,F=79.0,P<0.01;经dsp21作用的H441细胞增殖受到明显抑制,凋亡率较对照组明显升高,F=10.2,P<0.01。结论:RNAa技术激活p21WAF1/CIP1基因表达并抑制肺癌H441细胞增殖,诱导细胞凋亡,为肺癌的基因治疗提供了新的思路和方法。

摘要：目的观察黏蛋白1（MUC1）对食管鳞癌细胞生物学行为的影响并探讨其在上皮细胞一间质细胞转化过程中的作用。方法设计构建靶向MUC1基因的短发卡RNA（shRNA）慢病毒载体pGC-LV-MUC1小干扰RNA（siRNA）并感染人食管癌细胞株Eca109，检测其对MUC1表达的抑制作用；应用噻唑蓝（M1Tr）与Transwell侵袭实验检测抑制MUC1对肿瘤细胞增殖、侵袭能力的影响，并采用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）与Westernblot检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）在各组细胞中的表达差异。结果与对照组比较，感染pGC-LV-MUC1siRNA后，Eca109细胞内MUC1基因水平（1．000±0．061比0．612±0．019）和蛋白水平（11．230±1．120比7．440±0．970）明显降低（P〈0．05）；感染pGC-LV-MUC1siRNA能显著抑制Eca109细胞的增殖活性，48h（0．393±0．028比0．281±0．020），72h（0．792±0．052比0．463±0．028，P〈0．05）；感染pGC-LV-MUC1siRNA后，Eca109细胞的侵袭数量也明显降低[（87±4）个比（48±7）个，P〈0．05]；而Eca109细胞内***基因水平（1．000±0．072比2．510±0．767）和蛋白水平（0．070±0．020比0．130±0．030）明显增高（P〈0．05）。结论MUC1可能通过诱导上皮细胞-间质细胞转化（EMT）而促进食管鳞癌细胞增殖、侵袭。

摘要：目的观察RNA干扰沉默黏蛋白1（MUC1）表达，食管癌细胞株Eca109在顺铂作用下的增殖差异，探讨MUC1表达与肿瘤顺铂耐药性的关系。方法设计靶向MUC1基因的慢病毒载体pGC-LV-MUC1小干扰RNA（siRNA），并以感染复数（MOI）＝100转染人食管癌细胞株Eca109，用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白（GFP）表达，用Western blot方法检测细胞内MUC1蛋白含量，验证siRNA对MUC1基因抑制作用。设置浓度梯度0、5、15、30、45、60 μmol/L，分别作用0、12、24、48 h，应用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞抑制率，计算顺铂半数抑制浓度（IC50）。用Western blot检测细胞内凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关X蛋白（bax）的表达，验证凋亡通路激活。结果与对照组比较，转染了重组慢病毒颗粒pGC-LV-MUC1 siRNA的Eca109细胞（实验组）内MUC1蛋白水平（0.566±0.202比1.252±0.323，t＝3.119，P＝0.036）；顺铂作用12 h实验组IC50（μmol/L）（66.860±4.749比30.203±0.341，t＝13.335，P＝0.000）明显下降；顺铂作用24 h实验组细胞IC50（μmol/L）明显下降（13.710±0.617比33.680±1.737，t＝18.759，P＝0.000）；实验组凋亡相关蛋白bcl-2表达减少（0.551±0.190比1.416±0.139，t＝6.362，P＝0.003），bax的表达增加（0.553±0.055比1.345±0.155，t＝8.335，P＝0.001）。结论人食管癌细胞株Eca109沉默MUC1基因表达，可以导致细胞对顺铂耐药性下降。MUC1基因可能通过抑制凋亡激活途径，增加食管癌细胞对顺铂的耐药。