摘要：目的研究哮喘小鼠体内Tfh细胞以及Bcl-6蛋白的变化,并初步探讨氨茶碱对哮喘的治疗作用。方法 4~6周龄BALB/c小鼠40只,随机分成4组,每组10只。分别为正常对照组、哮喘模型组、氨茶碱治疗组及地塞米松阳性对照组。后3组建立哮喘模型后对应给以基础处置。按两因素析因设计测取小鼠气道反应性资料,HE染色观察小鼠肺组织的病理形态,流式细胞术检测Tfh细胞的比例变化,Western-blotting检测Bcl-6的蛋白表达量,Elisa法测定肺泡灌洗液以及血清中IL-4、IL-10的水平。结果哮喘模型组小鼠的气道阻力较正常组小鼠显著升高（P〈0.05）,HE染色切片中气道平滑肌增厚,且有大量的炎症细胞浸润,炎症评分较正常组明显升高（P〈0.05）,小鼠脾脏中的Tfh细胞的比例较正常对照组小鼠显著升高,Bcl-6蛋白含量较正常组明显升高,血清以及肺泡灌洗液中IL-4含量较正常对照组显著升高,而IL-10的水平显著下降;而氨茶碱治疗组以及地塞米松阳性对照组的气道阻力较哮喘模型组小鼠显著降低（P〈0.05）,小鼠HE染色切片发现其炎症细胞浸润程度较哮喘模型组显著降低,Tfh细胞的比例较哮喘模型组显著降低,肺组织中Bcl-6蛋白表达水平较哮喘模型组显著降低,血清以及肺泡灌洗液中IL-4含量较哮喘模型组明显下降,IL-10水平显著升高。结论哮喘小鼠Tfh细胞比例增加,Bcl-6蛋白水平升高,氨茶碱可以有效改善哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性,可能与其影响Tfh细胞比例以及IL-4、IL-10的水平有关。

摘要：目的观察硫氧还原蛋白过氧化物酶1(Prx-1)基因沉默对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肺成纤维细胞增殖、活性氧簇(ROS)水平及磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达的影响。方法体外培养肺成纤维细胞MRC-5,并分为对照组、TGF-β1组、阴性转染组和实验组。阴性转染组和实验组分别通过脂质体Lipofectamine2000转染阴性对照siRNA及设计好的3个Prx-1 siRNA(Prx-1 siRNA-209、Prx-1 siRNA-289、Prx-1 siRNA-453),培养48 h,real-time PCR法检测Prx-1 mRNA,选取转染Prx-1 siRNA-453的细胞用于后续实验。除对照组外,其余三组给予TGF-β1(5μg/L)刺激。TGF-β1刺激24 h后,MTT实验观察细胞增殖情况,2,7-二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)实验检测ROS水平;TGF-β1刺激45min后,Western blotting法检测p-AKT蛋白。结果对照组、TGF-β1组、阴性转染组、实验组OD值分别为0.56±0.07、0.81±0.10、0.88±0.18、1.16±0.18,ROS水平分别为2 922±291、4 348±484、4 660±375、5 415±436;实验组细胞增殖情况及ROS水平与其余三组相比,P均<0.01;TGF-β1组、阴性转染组与对照组相比,P均<0.01。对照组、TGF-β1组、阴性转染组、实验组细胞中p-AKT蛋白相对表达量分别为0.45±0.05、0.60±0.07、0.57±0.07、0.77±0.09;实验组与其余三组相比,P均<0.01;TGF-β1组与对照组相比,P<0.01。结论Prx-1基因沉默可增强TGF-β1对肺成纤维细胞的增殖诱导作用,上调细胞内ROS水平和p-AKT蛋白表达。