摘要：马梨形虫病(EP)是由巴贝斯虫属的驽巴贝斯虫(***)和泰勒虫属的马泰勒虫(***)感染引起的蜱传马属动物疾病。为建立EP两种病原的双重荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中***和*** 18S rRNA基因序列设计特异性引物和探针,经过反应体系和条件优化,建立了能够同时检测***和***的双重荧光定量PCR检测方法。特异性试验结果显示该方法与马疱疹病毒Ⅰ型(EHV-1),马疱疹病毒Ⅳ型(EHV-4),马流产沙门氏菌(*** equi),马链球菌(***),马传染性贫血病毒(EIAV)均无交叉反应,特异性强。敏感性试验结果显示,该方法对***和***的质粒标准品的检测下限均为100拷贝/μL,敏感性高;将***和***的质粒标准品10倍倍比稀释为1×10^(8)拷贝/μL~1×10^(4)拷贝/μL共5个稀释度,进行组内、组间重复性试验,结果显示该方法的组内、组间变异系数均小于5%,重复性好。利用本实验建立的方法对2019年我国北方西部地区200份马属动物全血样品进行检测,结果显示***的阳性率为47%(94/200),***的阳性率为2.5%(5/200),其中***和***混合感染率为1%(2/200),该方法与套式PCR的符合率为97.5%,且该方法具有耗时较短、易操作等特点。本研究首次建立的EP双重荧光定量PCR检测方法对***和***的鉴别检测、病原监测、流行病学调查等均具有重要的意义。

摘要：根据猪乳铁蛋白N端基因序列及表达载体质粒的基因融合特点,设计一对引物,以泌乳3日龄母猪乳腺组织RNA为模板,进行RT-PCR,获得含有猪乳铁蛋白基因N端1 077 bp目的片段,将其与表达载体质粒pPG612.1进行连接,通过转化进入宿主菌JM109细胞内,通过质粒提取、PCR鉴定、酶切鉴定和序列测定分析,表明猪乳铁蛋白N端PLFN基因已成功插入到表达载体质粒中,获得了猪乳铁蛋白干酪乳杆菌表达载体质粒pPG612-PLFN。将获得的重组质粒再分别电转化入干酪乳杆菌ATCC393、植物乳杆菌KLDS1.0344、副干酪乳杆菌KLDS1.0652及戊糖乳杆菌KLDS1.0413中,获得表达猪乳铁蛋白基因的多种重组乳酸菌分别为pPG612-PLFN/***,pPG612-PLFN/***,pPG612-PLFN/***和pPG612-PLFN/***.,为猪乳铁蛋白的乳酸菌表达及重组乳酸菌抗菌制剂的制备奠定了基础。